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目的: 探索对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)施加不同转速及时间的流体剪切力(fluid shear stress,FSS),对其合成环氧合酶2(cyclooxygenase2,COX-2)的影响,初步探讨两因素与HPDLF分泌COX-2关系。 材料与方法: 用高血清结合改良组织块酶消化法培养获得HPDLF,对细胞进行纯化及鉴定后,选用5-8代HPDLF进行体外加力实验。建立体外FSS加载装置系统,分别对细胞加载0rpm、5rpm、8rpm、12rpm、15rpm转速的FSS1、2、6h,使用免疫细胞化学染色检测细胞合成COX-2蛋白量的变化。 结果: 实验结果分析表明加力转速、加力时间以及转速与时间的交互作用对细胞合成COX-2均有影响(P值均<0.001),当不加载力时(0rpm),灰度值=250,测定蛋白为阴性表达。当不考虑加力转速因素时,不同时间点灰度值存在差异(P<0.001),加载1h时灰度值开始呈现减小趋势,加载2h时灰度值最低,而6h的灰度值最高(P<0.001)。当不考虑时间因素时,不同转速灰度值存在差异(P<0.001),加载5rpm时灰度值开始降低,当转速增加至12rmp时灰度值最低,再上升到15rpm时灰度值再次升高。从两因素分别来看,提示当加力转速及时间在一定范围内时,测定蛋白阳性表达量与之呈正相关,细胞形态趋于正常;当超出一定范围时,蛋白阳性表达量与之呈负相关,细胞呈现非生理正常形态。当同时考虑双因素变化时(P值均<0.001),转速为12rmp、时间为2h的灰度值最低。提示对HPDLF加载的FSS,其加载转速及时间在一定范围内时,测定蛋白的表达量与之呈正相关,当超出细胞生理承受范围时,蛋白表达量与之呈负相关。在本实验中,当加载12rpm的FSS,2h时,COX-2蛋白的表达量达到峰值。 结论: 体外加载FSS可影响HPDLF分泌COX-2蛋白量的表达。当加载转速和时间介于细胞生理状态下可承受范围之内时,对COX-2的合成为促进作用,反之则会抑制COX-2的合成分泌。