目的:观察补中益气汤“要药”升麻、柴胡配伍及不同浓度的补中益气汤对洛哌丁胺诱导的大鼠便秘模型的影响,探讨补中益气汤“要药”协同配伍的作用机制。方法:1.SD大鼠分别按0 mg/Kg/d、2 mg/Kg/d、4 mg/Kg/d、6 mg/Kg/d的剂量每天两次皮下注射洛哌丁胺,连续给药2天或7天后,观察各剂量组大鼠小肠推进率的变化。2.SD大鼠按照4 mg/Kg/d的剂量每天分两次皮下注射洛哌丁胺,复制小肠推进延迟大鼠模型,造模成功后分别灌胃给予1倍剂量补中益气汤、0.5倍剂量补中益气汤、0.25倍剂量补中益气汤和5 g/Kg/d的大黄,干预5天后处理并检测:(1)不同给药组大鼠小肠推进率的变化;(2)各组大鼠血清MTL、Gas和VIP含量的变化;(3)各组大鼠小肠组织形态的变化。3.SD大鼠按照4 mg/Kg/d的剂量每天分两次皮下注射洛哌丁胺,复制肠推进延迟大鼠模型,成功后分别灌胃给予莫沙必利、0.25倍剂量升麻、0.25倍剂量柴胡、0.25倍剂量升麻柴胡、0.25倍剂量补中益气汤全方去升柴、0.25倍剂量补中益气汤全方,干预5天后处理并检测:(1)不同给药组大鼠小肠推进率的变化;(2)各组大鼠血清MTL、Gas、VIP、SS、Ghrelin含量的变化;(3)测定上述各组大鼠小肠组织scf/c-kit、PKCα、Drd2、CHR-M3 m RNA表达的变化。结果:1.不同剂量的洛哌丁胺对大鼠小肠推进率的影响:与正常组比较,模型1组小肠推进率显著降低(P<0.05),模型2组小肠推进率显著下降(P<0.01),模型3组小肠推进率显著下降(P<0.01)。其中模型2组(4mg/kg/d)和模型3组(6mg/kg)更为显著。2.不同剂量的补中益气汤对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠小肠推进率的影响:与正常组比较,模型组大鼠小肠推进率显著降低(p<0.05),与模型组相比,随着治疗剂量的减少,小肠推进率呈现逐步升高趋势,到达0.25倍剂量时,小肠推进率显著增加(p<0.05);与模型组相比,大黄治疗组略有下降,无统计学意义(p>0.05)。3.不同剂量的补中益气汤对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠血清胃肠激素MTL、GAS、VIP的影响:剂量梯度组中的各组动物血清中的MTL、GAS、VIP与正常组相比,模型组动物血清中MTL、GAS含量均降低(p<0.01),VIP含量升高(P<0.01);与模型组相比,1倍剂量原方组、0.5倍剂量原方组、0.25倍剂量原方组大鼠的MTL含量逐渐上升(P<0.01、P<0.01、P<0.01),1倍剂量原方组、0.5倍剂量原方组、0.25倍剂量原方组大鼠的GAS含量逐渐上升(P<0.05、P<0.01、P<0.01),1倍剂量原方组、0.5倍剂量原方组、0.25倍剂量原方组大鼠的血清VIP含量逐渐下降(P<0.05、P<0.01、P<0.01),大黄组对MTL、GAS、VIP的影响无统计学意义(P>0.05、P>0.05、P>0.05),还呈现出与治疗组相反的趋势。4.不同剂量的补中益气汤对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠胃肠形态:模型组大鼠的胃肠有胀气现象,1倍剂量补中益气汤组有轻微胀气现象,0.5倍剂量补中益气汤组、0.25倍剂量补中益气汤组、正常组胃肠颜色、形态正常,无充血、水肿等。光学显微镜下,模型组和大黄组小肠组织粘膜损伤严重、大量坏死细胞脱落,大量炎症细胞浸润,粘膜层和肌层变窄。各个治疗组,有少量炎症细胞浸润的现象,偶尔发现个别样本固有层出现水肿的情况,轻微的损伤程度。正常组无明显损伤等异常现象。5.补中益气汤“要药”配伍对洛哌丁胺便秘大鼠小肠推进率的影响:与正常组比较,模型组大鼠小肠推进率显著降低(p<0.05);较模型组而言,阳性组、0.25倍升麻柴胡组(升柴组)、0.25倍的全方去升麻柴胡组(全方去升柴组)、0.25倍全方组(全方组)的小肠推进率显著增加(p<0.05、p<0.01、p<0.01、p<0.05,)。6.补中益气汤“要药”配伍组中洛哌丁胺便秘大鼠胃肠激素Ghrelin、VIP、MTL、GAS、SS的含量变化:便秘模型大鼠胃肠动力的指标中具有抑制胃肠运动的血管活性肠肽与具有促进胃肠运动的胃动素和胃泌素呈现相反的变化趋势,即抑制性胃肠激素VIP含量升高,促胃肠运动的激素MTL、GAS下降;具有促进胃肠动力的Ghrelin和抑制胃肠动力的SS均没有显著变化。补中益气汤组和“要药”升麻柴胡组均能够能够升高兴奋性胃肠激素GAS、MTL的含量,单独使用升麻、柴胡时对GAS和MTL的含量变化影响不大;补中益气汤全方组可以有效降低VIP的含量,“要药”升麻柴胡组和单独使用柴胡也可以降低VIP含量,全方去升麻柴胡对VIP含量没有影响。本次选择的阳性药物莫沙必利对VIP有一定的影响,对MTL、GAS、SS、Ghrelin含量影响不大。7.补中益气汤“要药”配伍组中洛哌丁胺便秘大鼠小肠组织中SCF/c-kit、、Drd2、CHR-M3、PKCαm RNA表达情况:与正常组相比,便秘模型组大鼠小肠组织中SCF/c-kit、、Drd2、CHR-M3、PKCαm RNA在小肠组织中表达均无明显变化。与模型组相比,补中益气汤治疗组能显著升高模型大鼠小肠组织中的PKCαm RNA的表达量,补中益气汤治疗组能略微升高模型大鼠小肠组织中的c-kitαm RNA的表达量,而全方及其他“要药”组合对其他指标则不能发生明显影响,说明了补中益气汤促肠动力的作用机制与SCF/c-kit、Drd2、CHR-M3、PKCαm RNA表达的变化无关,其具体可能的作用机制需要再作进一步深入探讨。结论:1.洛哌丁胺4mg/kg/d给药剂量为诱导大鼠便秘模型的较佳剂量。2.《脾胃论》原书用量相近的补中益气汤具有更好的促小肠动力作用,从实验研究的角度验证了李东垣组方用药的科学性。3.洛哌丁胺诱导的大鼠便秘模型为脾虚便秘模型。4.“要药”升麻柴胡对小肠动力有着较好的促进作用,补中益气汤去升麻柴胡的促小肠动力作用相对于含有升麻柴胡的补中益气汤全方组和升麻柴胡组稍有下降,表明“要药”在全方中发挥着较为重要的作用。5.补中益气汤促进洛哌丁胺大鼠便秘模型的作用机制可能与调节MTL、GAS、VIP等胃肠激素水平和修复小肠粘膜有关;与调节Drd2、CHR-M3、SCF/c-kit、PKCαm RNA表达的相关性较小。6.补中益气汤和“要药”升麻柴胡配伍都具有相近的促小肠动力作用,补中益气汤的优势有可能通过其他方面体现出来,如促进小肠吸收功能等,这需要在今后的实验中进一步研究。