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前言 糠秕马拉色菌(Malasseziafurfur,M.furfur)和表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis,S.epidermidis)均为人体皮肤常驻菌群。糠秕马拉色菌有嗜脂性,和脂溢性皮炎、花斑糠疹、马拉色菌毛囊炎、特应性皮炎等数种皮肤疾病有关系;表皮葡萄球菌曾认为是人体皮肤共生的无害菌群,如今证明是一种重要的条件性致病菌,是院内感染最常见的致病菌,主要引起器械相关的感染,其致病机制尚未明确。 脂溢性皮炎(seborrheicdermatitis,SD)是一种常见的皮肤科疾病,发病机制不清,包括内源性和外源性的多种因素,诸多证据表明,糠秕马拉色菌和SD有着密切的联系,而我科门诊三十几例脂溢性皮炎患者皮损皮屑培养后,培养出多于正常量的表皮葡萄球菌。有学者报道表皮葡萄球菌大多定植在身体较上面的部位,可能和这些部位有大量的皮脂有关,而SD好发于皮脂丰富区,因而我们猜测,表皮葡萄球菌和糠秕马拉色菌在人体皮肤复杂的微环境中可能互相作用,对SD的发病具有一定的影响。 金黄色葡萄球菌是皮肤表面的条件性致病菌,有学者证实其在特应性皮炎(atopicdermatitis,AD)的发生发展中扮演重要的角色,一些学者也表明糠秕马拉色菌和AD的发生发展有关,但金黄色葡萄球菌与糠秕马拉色菌二者之间的关系尚无定论。 某些疾病具有两种或两种以上的跨界微生物感染,菌群之间是如何作用的研究尚处于初始阶段。本课题将研究糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的增殖是否有影响,进而初步探讨皮肤感染性疾病的可能致病机制。 实验材料和方法 一、实验材料 糠秕马拉色菌(ATCC(@)14521TM)、表皮葡萄球菌(ATCC(@)12228)、金黄色葡萄球菌(ATCC65)、Dixon培养基(麦芽浸膏36g、蛋白胨6g、琼脂10g、油酸2ml、甘油2ml、Tween4010ml、蒸馏水1000ml)、营养琼脂培养基及牛肉膏蛋白胨液体培养基。 二、实验方法 1、实验一:糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌增殖的影响 (1)将活性不增殖状态(预实验证实糠秕马拉色菌在牛肉膏蛋白胨液体培养基中不增殖但仍分泌活性物质)的糠秕马拉色菌加入表皮葡萄球菌菌悬液中于96孔板中培养,带板盖放入酶标仪,600nm波长、32℃、每隔1小时、连续24小时检测吸光度(opticaldensity,OD值)的变化情况。 (2)将糠秕马拉色菌在牛肉膏蛋白胨液体培养基中过夜(10-12小时)培养后的上清液加入表皮葡萄球菌菌悬液中于96孔板中培养,带板盖放入酶标仪中,于600nm波长、32℃、每隔1小时、连续24小时检测OD值的变化情况。 (3)将灭活的糠秕马拉色菌(仍保持抗原性)加入表皮葡萄球菌中于96孔板中培养,带板盖放入酶标仪中,于600nm波长、32℃、每隔1小时、连续24小时检测OD值的变化情况。 2、实验二:糠秕马拉色菌对金黄色葡萄球菌增殖的影响 所有实验操作均同“实验一”。 三、统计学处理 所得数据使用EXCEL制作图表、SPSS软件进行数据分析,统计学方法采用重复测量方差分析,比较实验组和对照组的差异,以P值<0.05为差异具有显著性。 结果 一、糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌增殖的影响 (1)活性不增殖状态的糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌的增殖有促进作用,呈浓度依赖性。 (2)糠秕马拉色菌培养后的上清液对表皮葡萄球菌的增殖有促进作用,呈浓度依赖性。 (3)灭活的糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌的增殖未见明显作用。 二、糠秕马拉色菌对金黄色葡萄球菌增殖的影响 (1)活性不增殖状态的糠秕马拉色菌对金黄色葡萄球菌的增殖有抑制作用,呈浓度依赖性。 (2)糠秕马拉色菌培养后的上清液对金黄色葡萄球菌的增殖有促进作用,呈浓度依赖性。 (3)灭活的糠秕马拉色菌对金黄色葡萄球菌的增殖有抑制作用,呈浓度依赖性。 结论 活性不增殖状态的糠秕马拉色菌对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌增殖分别为促进和抑制作用;糠秕马拉色菌上清液对两种球菌的增殖有相同的促进作用,而其本身的孢子成分对表皮葡萄球菌的增殖未见明显作用,但对金黄色葡萄球菌的增殖有抑制作用。