丁香假单胞菌丁香致病变种 1336(Pseudomonas syringe pv.syringe Van Hall 1336)是重要的植物致病菌,寄主范围广,可侵害多种木本植物和草本植物的枝、叶、花和果,引发多种作物病害,其毒性与Ⅰ型和Ⅲ型效应蛋白有关。丁香假单胞菌丁香致病变种1336磷脂酰胆碱(PC)的合成由磷脂酰胆碱合酶(PCS)途径来完成。根据细菌基因组数据库推测,合成磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)的细菌超过细菌总数的15%,绝大多数都是与真核生物相关联的共生菌或者致病菌。本实验室通过对磷脂酰胆碱合酶基因(phosphatidylcholine synthase gene,PCS)在细菌致病性中的作用开展研究。经过两年多的努力,成功构建了三种细菌的pcs-突变体,发现PC缺失导致丁香假单胞菌丁香致病变种丧失了致病能力;而该致病能力丧失可能与Ⅰ、Ⅲ型分泌系统的功能密切相关。PC缺失影响细菌的毒性,可能的机制有(1)PC影响Ⅰ、Ⅲ型分泌系统组件蛋白及相关基因的表达,(2)PC影响Ⅰ、Ⅲ型分泌系统组件蛋白从细胞质向细胞膜上转运及在膜中组装,(3)PC影响Ⅰ、Ⅲ型分泌系统在膜中的拓扑结构。因此本研究集中在PC对Ⅰ、Ⅲ型分泌系统相关基因转录。通过比较Ⅰ、Ⅲ型分泌系统相关基因在野生型和pcs-突变型中的转录水平,探讨PC是否影响Ⅰ、Ⅲ型分泌系统相关基因在细菌水平中的转录。通过使用反转录PCR(RT-PCR)方法,检测了 17个Ⅰ型分泌相关基因,34个Ⅲ型相关基因在丁香假单胞菌1336野生型和不能合成PC的pcs-突变型中的转录水平,发现在水平上,野生型和pcs-突变体中17个Ⅰ型分泌相关基因,34个Ⅲ型分泌系统相关基因都没有表现出明显的差异。结果表明,PC缺失不影响Ⅰ、Ⅲ型分泌系统相关基因在转录水平上的表达。