抗T-2毒素和脱氧雪腐镰刀烯醇毒素的抗体制备和T-2毒素酶联免疫分析检测方法的建立

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qukangmin
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
单端孢霉烯族类毒素普遍存在于自然界中,主要由真菌产生。粮食在收获,运输,储存中被此类毒素污染的机率很高,带来了不可忽略的食品安全隐患。因此,建立一种方便、快速、可靠的检测方法来检测食品及谷物中毒素的含量是非常必要的。本研究的两种毒素T-2及DON(deoxynivalenol)毒素,分别是单端孢霉烯族类毒素A类和B类中重要的毒素,本文诣在建立其以ELISA为主的免疫学检测方法。   (1)从禾谷镰刀菌的大米发酵产物中分离纯化到纯度为97.7%的DON毒素,将高速逆流色谱与高效液相色谱法有效地结合,从300g大米发酵产物中获得8mgDON毒素,用于和载体蛋白偶联。   (2)通过DMAP(dimethylamiopryidine)催化法,合成了T-2-HS,通过碳二亚胺法与载体蛋白结合得到3种完全抗原,分别为T-2-HS-BSA,T-2-HS-OVA,T-2-HS-KLH,质谱鉴定其中的T-2-HS-BSA的偶联比为2.63。以T-2-HS-BSA免疫小鼠获得了高效价的抗T-2毒素多克隆抗体,建立了T-2毒素的间接竞争酶联免疫吸附检测方法。条件为:以20μg/mL的T-2-HS-KLH为包被原,封闭液为0.5%的卵清蛋白,多克隆抗体为一抗,标准品T-2毒素为竞争毒素。该方法的检测限为0.12μg/mL,线性范围0.28-30.84μg/mL,IC50值为1.45μg/mL,样品加标回收率为92.0%-104.6%,变异系数为15.1%-34.0%。   (3)采用DMAP催化法,成功将DON的三个羟基位点乙酰化,并成功合成了混合免疫原DON-(HS)n-BSA及包被原DON-(HS)n-KLH,质谱结果显示免疫原的偶联效果较佳,免疫动物后获得了抗DON的多克隆抗体。
其他文献
本文从干海带、鲜海带以及海带废渣液中提取褐藻糖胶。通过单因素实验确定了从不同原料中提取岩藻多糖硫酸酯的最佳方法和条件;又通过对其样品的理化性质分析,比较了用不同原料
异丙醇一步法气相合成MIBK属于典型的异步协同作用过程,包含脱氢、缩合、脱水、齐聚等反应,尽管反应原料只有异丙醇,但产物却明显多于丙酮法,构成了非常复杂的、平行和连串反应并
致病杆菌属(Xenorhabdus sp.)是一类与斯氏线虫(Steinernemasp.)互惠共生的昆虫病原线虫共生菌,能够分泌多种具有杀虫、抑菌和抗肿瘤的活性产物。课题组在前期研究中,构建了X.sto
仿刺参(Apostichopus japonicas, Selenka),又称刺参,是我国重要的海水养殖种类,其高效增养殖设施——人工参礁的研发是刺参增养殖业亟需研究、解决的课题。本文综述了刺参的