【摘 要】
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[目的]将人canstatin cDNA分泌型真核表达载体pSecTag2B／canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株。再用含canstatin的上清液作用
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[目的]将人canstatin cDNA分泌型真核表达载体pSecTag2B／canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株。再用含canstatin的上清液作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)以进一步研究canstatin的生物学作用。 [方法]将人canstatin cDNA的重组质粒pSecTag2B／canstatin稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO-K1)细胞并获得稳定表达canstatin蛋白产物的细胞株，应用RT-PCR检测细胞中canstatin基因的表达。收集细胞培养上清液中的蛋白，采用western-blotting法鉴定表达产物，用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验初步鉴定其生物学活性。通过绘制细胞生长曲线和流式细胞学技术进一步研究canstatin对血管内皮细胞的生物学作用。 [结果]成功的将人canstatin cDNA的重组质粒pSecTag2B／canstatin稳定转染CHO-K1细胞，RT-PCR法证实质粒pSecTag2B／canstatin已成功转染进入CHO-K1细胞。离心收集细胞培养上清液，western-blotting法鉴定上清液中有目的蛋白的表达。该细胞培养上清液在体内能抑制鸡胚绒毛尿囊膜中微血管的生成，可见CHO-K1，pSecTag2B／canstatin组给药区及其周围血管明显减少甚至未见血管纹理，小血管分支少，而其余四组鸡胚尿囊膜血管生成没有明显影响。通过鸡胚处理前后血管生成记数，CHO-K1，pSecTag2B／canstatin组与其余四组之间经统计学处理差异有显著性(P＜0.05)。通过绘制细胞生长曲线显示
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