甘皂颗粒干预唾液腺分泌分子机理研究

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目的:建立干燥综合征(SS)大鼠模型,给予中药复方甘皂颗粒,观察SS模型大鼠颌下腺水通道蛋白-5(AQP5),血清粘附分子ICAM-1、VCAM-1和E-选择素的表达以及颌下腺原代培养细胞胞内Ca2+离子浓度变化,探讨甘皂颗粒对干燥综合征的作用机制,为干燥综合征具有“痰凝郁结”的病机特点提供佐证。研究方法:雌性SPF级Lewis大鼠颌下腺匀浆离心后的上清液加弗氏完全佐剂(CFA)制成乳化免疫抗原,免疫同系鼠,同时注射白百破疫苗加强免疫,建立SS大鼠模型。造模成功后,用甘皂颗粒低、中、高3种剂量对SS模型大鼠进行干预,以丹地琼玉颗粒作为阳性对照,以生理盐水作为阴性对照。21天后离体颌下腺灌流法测试不同剂量甘皂颗粒对唾液腺的促唾液分泌作用;Western blot法分析甘皂颗粒对SS模型鼠颌下腺AQP5、ICAM-1、VCAM-1、和E-选择素表达的影响,荧光钙离子测定技术测定颌下腺原代培养细胞胞内Ca2+离子浓度,ELISA法测定血清中粘附分子ICAM-1、VCAM-1和E-选择素的表达。结果:1.颌下腺灌流结果提示:甘皂颗粒同复方丹地琼玉颗粒一样能明显提高氨甲酰胆碱(CCh)诱导的正常大鼠离体唾液腺的分泌。2.干燥综合征模型大鼠的制备:造模3周后,模型组与正常对照组比较,大鼠的唾液流率下降,饮水量增加,差异有显著性(P<0.01),造模成功。3.甘皂颗粒对干燥综合征模型大鼠唾液腺的干预实验:甘皂颗粒中高剂量组及丹地琼玉颗粒组与模型对照组相比其唾液流量,颌下腺指数明显下降,且差异有显著性(P<0.01),低剂量组也有变化,但差异不显著。4. Western blot方法显示:模型组较正常组相比颌下腺中AQP5表达显著下调,给药组较模型组相比AQP5表达显著增强;SS大鼠颌下腺中ICAM-1、VCAM-1、E-选择素在造模组中的表达较正常组显著上调,给药组ICAM-1、VCAM-1、E-选择素的表达较造模组显著性下调,表明甘皂颗粒可降低炎症因子表达,部分缓解病情。5.甘皂颗粒中高剂量给药组SS大鼠颌下腺细胞中可检测出胞内Ca2+离子浓度低于模型对照组,差异有显著性(P<0.01)。6.甘皂颗粒中高剂量给药组SS大鼠血清中细胞粘附分子-1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的高表达和E-选择素的低表达且P<0.01。结论:根据以上实验及研究结果,本研究得到以下结论:甘皂颗粒具有治疗SS大鼠的作用,其机制主要是上调AQP5的表达,降低细胞内Ca2+离子的浓度,通过抑制SS模型大鼠过度增强的免疫反应,减少颌下腺中淋巴细胞浸润,缓解炎症因子侵袭,减少大鼠颌下腺ICAM-1、VCAM-1、E-选择素的表达,从而改善唾液腺分泌功能,增加唾液流量,缓解干燥综合征口腔干燥的症状。意义:通过中药的药物实验,从分子水平加以阐述证明,进一步为中药治疗干燥综合征研究提供新的思路。
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