早期NAFLD大鼠血液流变学变化及与血瘀证关系的实验研究

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目的:观察早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流变学的动态变化:探讨早期非酒精性脂肪肝与血液流变学、血瘀证的关系,为临床应用活血化瘀法治疗早期非酒精性脂肪肝提供理论依据。方法:1.模型制备:雄性SD大鼠160只随机分为五组:正常组50只、模型组50只、膈下逐瘀汤组20只、辛伐他汀组20只、阿司匹林组20只,正常组给予普通饲料喂养,其余各组给予高脂饲料(普通饲料基础上加10%猪油,2%胆固醇)喂养,喂养时间为12周。2.分组给药:8周末至12周末,正常组、模型组给予生理盐水灌胃,膈下逐瘀汤组、辛伐他汀组、阿司匹林组分别给予膈下逐瘀汤、辛伐他汀、肠溶阿司匹林灌胃。3.指标检测:3.1体重、肝湿重、肝体比:每周称大鼠体重,造模第4、6、8、10、12周末分别取各组大鼠腹主动脉血及肝组织,称大鼠肝湿重,计算肝指数;3.2肝组织形态学观察:肝组织石蜡切片苏木精一伊红(HE)染色(光镜)、冰冻切片苏丹Ⅲ染色(光镜)观察病理改变情况;3.3生化指标:血脂:胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);肝脂:胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);3.4血液流变学指标:全血粘度(低、中、高切)、血浆粘度、血浆纤维蛋白原、血小板聚集率、红细胞聚集指数、红细胞变形指数。结果:1.一般情况:与正常正常组比较,第4周后模型组大鼠进食量及体重明显增加,8周末模型组大鼠形体较正常组模型肥胖,部分大鼠出现便溏;第8周后模型组大鼠明显肥胖,体重增长放慢,进食减少,行动较缓慢。2.大鼠体重、肝湿重、肝指数变化:4、6、8、10、12周末模型组大鼠体重、肝湿重较正常组显著升高(P<0.05或P<0.01),6、8、10、12模型组大鼠肝指数较正常组显著升高(P<0.05或P<0.01)。3.形态学改变:4、6、8、10、12周末,正常组大鼠肝组织肉眼观察均呈现鲜红色,边缘锐利,弹性好;肝组织石蜡切片HE染色、冰冻切片苏丹Ⅲ染色光镜下观察:肝索沿中央静脉呈放射状分布,肝细胞呈规则的多边形,大小均一,无水样变性及脂肪变性。模型组大鼠肝组织肉眼观察:4周末,肝组织颜色、形态正常,6周末,肝组织体积较正常组增大,包膜紧张,8周末,肝组织体积明显增大,包膜紧张,呈现砖红色,触之有油腻感,10周、12周末肝组织体积颜色逐渐变浅,部分大鼠肝脏变为黄白色,弹性减低;镜下观察:4周末部分模型组大鼠肝细胞内见散在脂肪空泡,6周末大部分模型组大鼠肝细胞内出现脂肪空泡,且数量较4周末明显增多,8周末,1/3以上的肝实质细胞胞浆中出现脂肪空泡,部分空泡融合将细胞核挤向细胞边缘。10周、12周末模型组大鼠肝细胞脂肪变性逐渐加重,到12周末2/3以上肝细胞发生脂肪变性,肝细胞肿大,小部分肝细胞胞浆疏松呈网状、半透明,大小不一,肝索排列较紊乱,部分肝血窦变窄。4.生化指标:与正常组比较,4、6、8、10、12周末模型组大鼠血清TC、TG、肝TG显著升高(P<0.01),6、8、10、12周末模型组大鼠血清TG显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,10周、12周膈下逐瘀汤组、辛伐他汀组大鼠血清TC、TG显著降低(P<0.05或P<0.01);膈下逐瘀汤组和辛伐他汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05);10周末、12周末膈下逐瘀汤组、辛伐他汀组大鼠肝TC均降低,10周末差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),12周末,差异无统计学意义(P>0.05);10周末、12周末膈下逐瘀汤组、辛伐他汀组大鼠肝TG均降低,其中10周末,膈下逐瘀汤组大鼠无显著差异(P>0.05),辛伐他汀组大鼠有显著差异(P<0.05),12周末膈下逐瘀汤组大鼠有显著差异(P<0.05),辛伐他汀组大鼠无显著差异(P>0.05),膈下逐瘀汤组和辛伐他汀组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5.血液流变学指标:与正常组比较,4周末模型组大鼠血液流变学各项指标与正常组接近,差异无统计学意义(P>0.05),6、8、10、12周末,模型组大鼠全血粘度(低、中、高切)、血浆粘度、红细胞变形指数、血浆纤维蛋白原(FIB)血小板聚集率(PAg T)显著升高(P<0.05或P<0.01),第8、10、12周红细胞聚集率显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,10周末膈下逐瘀汤组、阿司匹林组大鼠全血粘度(高、中、低切)、血浆粘度、红细胞聚集指数、血浆FIB、PAg T显著降低(P<0.05或P<0.01),第12周末膈下逐瘀汤组、阿司匹林组大鼠全血粘度(高、中、低切)、血浆粘度、血浆FIB、PAg T、红细胞聚集指数、红细胞变形指数显著降低(P<0.05或P<0.01)。膈下逐瘀汤组和阿司匹林组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.早期非酒精性脂肪肝大鼠存在血液流变学异常改变,早期非酒精性脂肪肝的发生、发展与血液流变学、血瘀证关联;血液流变学指标可以作为诊断和评估早期非酒精性脂肪肝血瘀证程度和疗效的参考指标。2.膈下逐瘀汤可降低早期非酒精性脂肪肝模型大鼠的血脂和肝脂。
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