荧光定量PCR技术检测宫颈感染HPV方法的研究

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目的探讨荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR)技术在女性中筛查检测HPV(Human Papillomavirus,HPV)感染的可行性,为其临床应用提供实验依据和理论支持。方法①收集600例体检人员的宫颈分泌物,按照荧光定量PCR试剂盒要求提取宫颈分泌物DNA。以提出的DNA为模板,按照试剂盒要求配置PCR反应液,混合后上机行聚合酶链反应,测定HPV DNA拷贝数。认为HPV DNA拷贝数高于最低检测限即50拷贝/ml的分泌物为可疑阳性标本;②对荧光定量PCR结果判定可疑阳性的标本,采用膜条杂交技术,对其可能感染的HPV进行分型;③针对膜条分型结果,选择单一亚型HPV感染的阳性标本DNA进行序列测定。结果①600例体检人员的年龄介于19岁~58岁之间,共63例荧光定量PCR结果高于50拷贝/ml,即怀疑感染了HPV,视为可疑阳性标本,总阳性率为10.50%,其中≤35岁年龄组,感染率最高,其次分别是35~50岁组和≥50岁组;②可疑阳性标本DNA进行膜条杂交实验,结果显示62例有蓝色特异性斑点出现,1例未出现,阳性检出率为98.41%,其中以感染HPV16、58、18型为多,检出率分别为34.92%,23.81%和15.87%,并以感染单个HPV亚型为主;③单一型HPV感染的DNA测序结果与Genebank公布的HPV基因L1保守区域序列基本一致。结论膜条杂交结果和测序结果从不同角度印证了荧光定量PCR技术检测HPV感染存在的准确性,其结果可信性高。又由于其速度快、全封闭反应、高通量等优点,故可以用于女性人群中宫颈HPV感染的普查,结合其它辅助检查,对预防宫颈癌的发生有一定的意义,并具有进一步的推广和应用价值。
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