球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种重要的杀虫真菌，在国外已被开发成多种商品制剂。我国虽有多年的研究历史，但至今尚无商品制剂注册。在本实验室若干前期工作的基础上，本研究对一球孢白僵菌杀蚜菌株的高纯度孢子粉制备、真空贮存、制剂技术及田间应用效果进行了的改进和评价。主要内容包括球孢白僵菌对桃蚜(Myzus persicae)接种后特定时间内的侵染率测定、孢子乳悬剂配方的优化、高纯度孢子粉的中试、孢子粉的真空贮存和孢子乳悬剂对甘蓝上桃蚜的田间防效试验等。 特定时间的侵染速率 用杀蚜球孢白僵菌株SG8702的分生孢子悬液(5×10~6个／mL)对桃蚜刚完成最后一次蜕皮的成蚜进行表面接种，在接种后56 h期间每隔8 h取样用0.2％百菌清液处理蚜虫，使其体表残存的孢子全部失活，然后分别置于10℃和20℃下逐日观察感病死亡情况。同时设3个对照，CK 1接种后不用百菌清液进行处理；CK 2不接菌，只用清水清水处理蚜虫体表；CK 3不接菌，但用0.2％百菌清处理蚜虫。每温度下特定时间段处理(含对照)的蚜虫数63～128头，共累计处理和观察1636头蚜虫。结果显示，与对照相比，接种后8、16、24、32、40和56h内，10℃下的有效侵染率分别为22.9％、48.8％、64.9％、80.4％、72.7％和98.3％，20℃下分别为31.6％、48.8％、58.6％、86.9％、97.2％和98.7％。由此表明，在10～20℃范围内，接种后24h内是该菌有效侵染桃蚜的关键时段，此期间有效侵染率达59～65％。这充分说明SG8702具有作为蚜虫微生物防治因子的具大潜力。 孢子乳悬剂配方优化 为了增强实用性，对本实验室研制的SG8702孢子乳悬剂配方进行了改进和优化。在常温下将高纯度孢子粉分别在不同类型溶剂油载体中贮存，通过定期检测活孢率发现，溶剂油H对孢子活性影响最小，可作为孢子乳悬剂的溶剂载体。在含等量孢子粉的该溶剂油中按容积比0.1％、1％和10％分别加入乳化剂OP，常温封闭贮存，定期测定活孢率的结果显示，1％OP乳化剂对孢子悬浮乳化的效果最好而活孢率影响最小，可用作乳悬剂配制的乳化剂。其它生物学相容的助剂包括作为悬浮稳定剂的甲基纤维素钠，用量为0.3％(w／v)；抗坏血酸制品为紫外保护剂，用量为0.1％；10％吡虫啉可湿性粉剂为增效剂，用量为1％。 SG8702孢子粉的中试生产 采用传统的液一固两相发酵法中试生产SG8702分生孢子粉。在液相发酵阶段对菌丝生物量、芽生孢子含量和pH值等指标每隔3～4小时进行检测发现，发酵过程中菌丝生物量与pH值的变化趋相反，而与pOH(=14-pH)的变化趋势正好吻合，显示用pOH值指标可以监测发酵过程中的菌丝生物量的高低。将发酵42小时的菌液按1：1.5的比例转至40％麦麸和60％稻糠的混合基质上进行固相发酵产孢，浅盘开放培养，温度控制在24-26℃，相对湿度控制在95％左右，经10天培养产孢和 30刁5℃下晾干3天。最后收获抱子粉4公斤，其含泡量738扛91）亿抱子／克，含水量 8．扔％＃1们m，萌发率兀＊％忙3．刀叨。综合考虑，传统的两相发酵技术局限性较 大，较难用于大量生产适合配制高质量乳悬剂的高纯度抱子粉，应当探索新的替代生产 工艺。 抱子乳悬剂的田间杀蚜效果 用SG8702菌株的高纯度分生抱子粉，配制成含抱量 为旷‘个lmL的抱于乳悬剂1，在此基础上按 1％（w／V）的比例添加 10％毗虫咐可湿剂而 得抱子乳悬剂11。于2001年7月对两种泡子乳悬剂在云南昆明进行了自然条件下田间 甘蓝上桃蚜的小区O．5x4．8 m）药效试验，各 3个浓度（含抱量分别为 10’、10‘及 10’个 ／mL），常规喷雾处理，另设清水喷雾对照，随机区组排列。在喷菌后连续28天的田间 蚜虫密度定期抽样调查中，乳悬剂11的1000倍稀释液口’个lmL）喷雾有效抑制了蚜虫 数量增长，喷后第7～28天防效始终保持在90％以上。乳悬剂1的相同稀释液喷雾对桃 蚜的控制略逊于乳悬剂11，但喷后第7天的相对防效也达到85％，此后维持防效70％以 上达两周，第24天才降至64．4o，第28天降至52．6o。即使用含抱量10‘和10’个／mL 的菌液喷雾，乳悬剂1仍表现出明显的控蚜效果，而添加微量毗虫咐的乳悬剂11的控蚜 效果总是优于同一浓度下的乳悬剂1。昆明地区夏季温和而多小雨的气候有利于抱子乳 悬剂发挥作用。 抱子粉的真空贮存 将冷冻干燥获得的含水量为3．7o，活抱率为95．00的SG8702 高纯度抱子粉分装于玻璃小瓶内，抽真空后分别贮于4OC和 20℃下，每隔2个月定期抽 样测定活抱率、抱子内贮总糖和总蛋白含量，持续检测2年。结果表明，4oC下真空贮 存的活抱率、内贮总糖和总蛋白含量总是高于20℃下。最初4个月，不同温度下活抱率 下降缓慢，在第 4～6个月和第 18月后经历二个急剧下降期，4aC下活抱率幅第 4个月的 87．90降至第6个月的75．8o，20℃下则从77．3o降到55．l％。在第2次剧降中。20℃下 活抱率由第18个月的220下降为第22个月的0，而同期4℃下也从60O下降到32o。