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目的:通过观察补益、活血、清热及其合方抑制人胰腺癌细胞PC-3增殖和IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路的影响,研究补益、活血、清热及其合方治疗胰腺癌的作用机理,探讨正虚、血瘀、热毒与胰腺癌病变和IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导的关系,进一步揭示胰腺癌的中医病机本质,为临床上治疗胰腺癌提供有效方药。
方法:采用人胰腺癌PC-3细胞为实验对象,以MTT法从候选中药中筛选出抑制胰腺癌细胞的最佳药物,根据正交试验优选出疗效最好的方剂,将对照组和补益、活血、清热及其各个合方组作用于细胞,在倒置显微镜下观察PC-3细胞形态的改变,并用Western blot检测对PC-3细胞IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路各蛋白表达的影响。
结果:1.补益、活血、清热及其合方对PC-3细胞增殖明显抑制,影响其形态特征改变。显微镜下观察补益组细胞皱缩,呈长条形,细胞间隙加大;活血组细胞表面粗糙,胞质内充满颗粒状或空泡样物质,细胞碎片少;清热组细胞可见细胞皱缩,透光度减小,形态不规则,细胞间基质呈现丝网状,贴壁性变差;合方组为前三组相兼形态表现,细胞表面粗糙,皿中有较多的细胞碎片;2.补益、活血、清热及其合方均能抑制PC-3细胞生长,且活血组作用最强。各组随药物浓度的增加,抑制率逐渐增强,呈量效依赖关系;3.人胰腺癌PC-3细胞可检测到IGF-1αR-PLD-PKCa蛋白分子的过度表达;4.当用IC50药物剂量处理细胞时,补益、活血、清热及其合方均能抑制IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为:合方组>清热组>活血组>清热活血组。
结论:1.补益、活血、清热及其合方均能明显抑制人胰腺癌PC-3细胞的生长,清热和合方组效果较好,表明清热治法在胰腺癌的中医病机中起着重要的作用;2.胰腺癌发病和IGF-1αR-PLD-PKCa转导通路信号增强密切相关;3.补益、活血、清热及其合方均能下调人胰腺癌PC-3细胞IGF-1αR-PLD-PKCa信号通路各蛋白表达水平,该方抑制IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导是其抑制人胰腺癌细胞增殖的部分机理;4.在胰腺癌病变中,正虚、血瘀、热毒与IGF-1αR-PLD-PKCa信号转导表达增强密切相关;5.清热解毒、活血化瘀、扶正培本合用是中医药防治胰腺癌的重要治法。