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目的:通过As2O3联合γ分泌酶抑制剂影响肝癌Hep G2细胞耐药性的研究,探讨As2O3逆转Hep G2细胞耐药作用与Notch信号通路的关系,揭示As2O3逆转Hep G2细胞耐药的可能机制,为丰富肝癌治疗方案提供实验依据和参考。方法:1.体外培养Hep G2、Hep G2/ADM细胞;2.以As2O3(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0)mg/ml、MW167(10、20、40)umol/L、ADM(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0)mg/ml干预Hep G2、Hep G2/ADM细胞24h、48h、72h,MTT法检测细胞增殖,筛选As2O3、MW167处理细胞的最佳时间和剂量,SPSS软件计算IC50、耐药倍数;3.药物干预不同分组对细胞耐药性的影响:⑴实验分为空白组和干预组【联合组(MW167+As2O3)、MW167组、As2O3组】;⑵MTT法计算逆转倍数;⑶流式细胞仪检测干预因素对凋亡的影响;⑷RT-PCR检测各组细胞Notch-1、Bcl-2、Caspase-3、MDR-1 m RNA表达;⑸Western blot法检测各组细胞Notch-1、Bcl-2、Caspase-3、MDR-1蛋白表达。结果:1.培养Hep G2、Hep G2/ADM细胞,镜下呈梭形、核大、团状贴壁生长,与ATCC细胞库图片比对确定为人肝癌Hep G2细胞株;2.确定以增殖抑制率小于20%的药物剂量(As2O3 0.25mg/L、MW167 10umol/L)作用时间(48h)为干预方法,As2O3、MW167、ADM处理细胞的IC50值随时间推移依次下降(P<0.05),耐药倍数24h(1.48倍)、48h(1.71倍)、72h(16.57倍),(P<0.05);3.对细胞耐药性研究:⑴As2O3、MW167、ADM对增殖的影响为同一剂量随作用时间延长,增殖抑制率增加(P<0.05),相同作用时间随剂量增加,增殖抑制率增加(P<0.05),同一药物相同作用时间对Hep G2/ADM细胞增殖抑制作用更强(P<0.05);⑵逆转倍数为联合组2.79倍﹥MW167组2.16倍﹥As2O3组1.79倍(P<0.05);⑶凋亡率为Hep G2细胞联合组(42.63±0.73)%﹥MW167组(28.73±0.32)%﹥As2O3组(23.37±0.40)%﹥空白组(6.77±0.15)%,组间比较P<0.05,Hep G2/ADM细胞联合组(52.066±0.321)%﹥MW167组(42.600±0.700)%﹥As2O3组(36.166±0.650)%﹥空白组(4.433±0.208)%,组间比较P<0.05;⑷RT-PCR检测各组细胞Bcl-2、Notch-1、MDR-1m RNA表达与Western blot法检测其蛋白表达结果一致,干预组Bcl-2、Notch-1m RNA与蛋白表达下降(联合组﹥MW167组﹥As2O3组),P<0.05;Caspase-3 m RNA及蛋白表达升高(联合组﹥MW167组﹥As2O3组),P<0.05;与Hep G2细胞相比Hep G2/ADM细胞中MDR-1m RNA及其蛋白呈高表达,P<0.05,干预后Hep G2/ADM细胞MDR-1m RNA及其蛋白表达下降明显,联合组﹥MW167组﹥As2O3组,P<0.05,干预前后Hep G2细胞MDR-1m RNA及其蛋白表达无差异(P﹥0.05)。结论:1.As2O3能够抑制Notch-1表达,促进Hep G2、Hep G2/ADM凋亡,抑制细胞增殖,逆转细胞耐药性,且对Hep G2/ADM细胞作用更强。2.As2O3与γ分泌酶抑制剂联合方案逆转HepG2/ADM细胞耐药作用更强,与两者能够一致性下调Bcl-2、Notch-1、MDR-1并上调Caspase-3基因和蛋白表达有关。