论文部分内容阅读
目的目前,酒精已较为广泛的使用于人们日常生活中,其带来的健康问题也逐步凸显,酒精所引起的生殖系统问题也日渐加剧,对于酒精性男性生殖系统损伤的评价目前临床上尚缺少较为实时、无创、客观的评价方法。本文旨在探讨超声造影及其量化分析技术在评价慢性酒精中毒所导致的睾丸微血管损伤的临床使用价值,以及与睾丸生精功能的关系。方法制备普通脂质微泡(Microbubbles,MB)超声造影剂,并检测MB的相关物理特性及其性能特征。随机将72只健康新西兰兔分为12组,每组6只。分别为对照组S组(S1、S2、S3组)、低剂量酒精处理组L组(L1、L2、L3组)、中剂量酒精处理组M组(M1、M2、M3组),高剂量酒精处理组H组(H1、H2、H3组)。均饲养7天适应后,各组每日给予等量饲料正常饮食,同时低剂量酒精处理组每隔一日予60%酒精5ml/kg灌胃,中剂量酒精处理组每隔一日予60%酒精7.5ml/kg灌胃,高剂量酒精处理组每隔一日予60%酒精10ml/kg灌胃,建立兔睾丸不同剂量慢性酒精中毒损伤模型,对照组每隔一日予生理盐水7.5ml/kg灌胃。S1、L1、M1、H1组饲养30日,S2、L2、M2、H2组饲养60日,S3、L3、M3、H3组饲养90日。各组新西兰兔按要求饲养时间饲养结束后于次日均行二维灰阶、彩色多普勒检查,并观察其声像图特征。随后均行MB超声造影观察其表现,并应用量化分析技术分析各组的造影各项参数的变化,以便获得精确、动态的睾丸组织血流灌注信息。实验结束后行超声引导下穿刺取心脏血约10ml,实验室检测血浆内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)水平,并取一侧睾丸组织行HE染色切片、睾丸组织Johnsen’s评分及丙二醛(MDA)含量检测、透射电镜标本制作,对比观察各组的光镜组织病理学、MDA含量、透射电镜超微结构改变及其差异。结果MB的相关物理特性及性能特征检测:MB肉眼观上呈现为乳白色液体,光镜下为大小、分布相对均匀一致的规则圆形微泡。微泡浓度约4.9×10~8个/ml。常温静置0.5h后,微泡数量减少,静置24h后,微泡数量明显减少、粒径变小。睾丸声图像表现:对照组、不同酒精剂量及时间处理组造影前表现基本相一致。双侧睾丸大小相近,实质回声均匀,彩色多普勒血流信号按照Adler血流半定量分级标准介于I-II级之间。超声造影表现:1.对照组:S1、S2、S3组之间超声造影各参数差异无统计学意义(P>0.05)。2.不同酒精剂量及时间处理组之间:超声造影参数PI及AUC随酒精剂量及时间的增加逐步减低(P<0.05),血流充盈量逐步减低,由于PI的下降,Slope亦逐步减低(P<0.05),而TP、MTT、DT/2的差异无统计学意义(P>0.05)。ET-1及NO水平、MDA含量检测差异:对照组血浆ET-1及NO水平、MDA含量差异无统计学意义(P>0.05)。酒精处理组血浆ET-1及NO水平、MDA含量随酒精剂量及时间的增加而升高(P均<0.05)。光镜病理表现:1.对照组:生精小管基膜完整,上皮厚,各级生精细胞有序排列,近管腔面可见大量精子生成;间质结构清晰,无肿胀、增宽,间质微血管形态正常,内可见红细胞。2.不同酒精剂量及时间处理组:随着酒精剂量及时间的增加,生精小管管腔逐步扩张,生精上皮层逐渐变薄,管腔内精子逐渐减少,甚至无精子生成。间质微血管早期表现为微血管扩张,随着剂量及时间的增加,微血管管壁逐渐增厚,管腔内炎症细胞逐渐增多,间质逐步肿胀、增宽。3.睾丸组织Johnsen’s评分:对照组S各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。对照组与不同剂量酒精处理组(L组、M组、H组)及不同时间组(30d,60d及90d)各对比组组间比较差异均有统计学意义(P均<0.05),S1组与L1组、L1组与M1组、M1组与H1组组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05),余各比较组组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。Johnsen’s评分整体上随酒精剂量及时间的增加而降低。透射电镜超微结构表现:1.对照组:生精小管基膜完整,各级生精细胞排列层次清晰、有序,生精细胞形态正常,胞核完整,胞质线粒体、内质网形态正常,管腔内可见大量精子生成。间质结构完整,微血管内皮细胞、周细胞及间质细胞形态正常,膜性结构完整,胞核完整,染色均匀,胞质线粒体及内质网形态正常,微血管基膜完整。2.不同酒精剂量及时间处理组:随着酒精剂量及时间的增加,生精小管的损伤程度逐渐加重,生精细胞坏死数目逐渐增多,管腔内精子逐渐减少,甚至生精细胞分化成熟障碍,无精子生成。间质微血管的结构损伤程度亦逐渐加重,早期微血管内皮细胞胞质内线粒体肿胀空泡化,随着剂量及时间的增加,微血管内皮细胞及周细胞胞质及胞核溶解、坏死,甚至大量脱落,严重者基膜溶解、中断;间质结构逐步紊乱,可见广泛线粒体肿胀及内质网扩张、空泡化,间质细胞的破坏逐渐加重。结论1.慢性酒精摄入可引起睾丸微血管损伤,表现为以血流灌注量减少的睾丸血流动力学改变,继而引起组织的缺血缺氧,导致生精功能障碍。2.酒精对睾丸微血管及生精功能的损伤呈剂量-效应及时间-效应关系,睾丸微血管功能变化与其超微结构改变同步,睾丸微血管损伤及生精功能改变具有一致性。3.超声造影可用于评估慢性酒精中毒所致的睾丸微血管损伤,并反映生精功能改变。超声造影定量参数PI及AUC整体上随着酒精剂量及时间的增加而减低,微血管损伤程度越重,PI及AUC越低,生精功能损伤越重。