【摘 要】
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该研究采用聚合酶联反应(PCR)技术从伽氏疏螺旋体代表菌株PD的全基因组DNA中扩增出ospC基因,经酶切处理后,克隆到PET-11D表达载体,转入大肠埃希菌BL中,经异丙基-β-D-半乳糖
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该研究采用聚合酶联反应(PCR)技术从伽氏疏螺旋体代表菌株PD<,91>的全基因组DNA中扩增出ospC基因,经酶切处理后,克隆到PET-11D表达载体,转入大肠埃希菌BL<,21>中,经异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白免疫印迹等方法分析.获得正确的阳性克隆子后,大量表达,获得重组外膜蛋白C(rOspC).经纯化、定量后用于ELISA检测莱姆病病人血清抗体.同时结合间接免疫荧光抗体试验(IFA)、蛋白免疫印迹和全菌提取抗原ELISA,评价重组抗原ELISA与其他各试验检测莱姆病的效果.结果表明:中国PD<,91>菌株ospC基因的同源性与国外其他菌株的ospC存在较大差异.rOspC在宿主菌BL<,21>中能稳定、高效表达.分子量约为22KD.蛋白免疫印迹显示其具有强抗原性.与其它检测方法比较发现,rOspC作抗原用于ELISA具有较好的特异性和一定的敏感性.rOspC是一种较好的莱姆病早期诊断性抗原.
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