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目的比较ERα、ERβ、AP-1、VEGF在子宫内膜异位症(Endometriosis,EMT)患者中异位内膜和在位内膜的细胞定位、蛋白表达情况及其可能存在的关联,并比较这些蛋白在月经周期中增生期与分泌期表达的差异,以探讨EMT的发病机制,为临床靶向治疗EMT提供理论依据。方法1.选取2016年7月至2017年7月期间因卵巢型子宫内膜异位症(Ovary endomeitriosis,OEMT)就诊于安徽医科大学第一附属医院妇产科的患者40例,其中增生期(n=16),分泌期(n=24),开腹或腹腔镜下行异位囊肿剥除术,实验组A收取囊壁,即异位内膜组织,实验组B为同一患者的在位内膜组织;以同期因单纯输卵管因素致不孕的患者37例为对照组,其中增生期(n=22),分泌期(n=15),行宫腔镜检查,轻刮少量内膜组织为对照组。采用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)的方法分析比较ERα、ERβ、AP-1和VEGF在异位内膜、在位内膜及正常内膜组织的阳性表达及定位分布。2.随机选取实验组12例,增生期和分泌期各6例,选取对照组12例,增生期和分泌期各6例,采用蛋白质印迹法(Western blot)定量检测ERα、ERβ、AP-1和VEGF在异位内膜、在位内膜及正常内膜组织中的表达量,并比较ERα、ERβ、AP-1和VEGF在不同组织中增生期和分泌期蛋白表达的差异。结果1.免疫组织化学染色结果1.1实验组异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜组织均表达ERα,阳性率分别为48.0%,55.8%,37.3%,且腺上皮细胞和间质细胞均有定位。实验组内,在位内膜ERα的表达高于异位内膜,差异具有统计学意义(χ~2=4.812,P=0.028<0.05);实验组与对照组比较,异位内膜ERα的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=8.990,P=0.003<0.05),在位内膜ERα的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=26.281,P<0.001)。1.2实验组异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜组织均表达ERβ,阳性率分别为55.0%,50.2%,33.2%,且腺上皮细胞和间质细胞均有定位。实验组内,异位内膜ERβ的表达与在位内膜比较,差异无统计学意义(χ~2=1.801,P=0.179);实验组与对照组比较,异位内膜ERβ的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=36.831,P<0.001),在位内膜ERβ的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=22.809,P<0.001)。1.3转录因子AP-1的主要组成成分是c-Jun蛋白,本实验用c-Jun代表AP-1在组织中的表达。实验组异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜组织均表达c-Jun,阳性率分别为88.5%,86.8%,79.5%,且腺上皮细胞和间质细胞均有定位。实验组内,异位内膜c-Jun的表达和在位内膜比较,差异无统计学意义(χ~2=0.565,P=0.452);实验组与对照组比较,异位内膜c-Jun的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=11.782,P=0.001<0.05),在位内膜c-Jun的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=7.325,P=0.007<0.05)。1.4实验组异位内膜、在位内膜和对照组正常内膜组织均表达VEGF,阳性率分别为83.2%,81.2%,64.9%,且腺上皮细胞和间质细胞均有定位。实验组内,异位内膜VEGF的表达与在位内膜比较,差异无统计学意义(χ~2=0.548,P=0.459>0.05);实验组与对照组比较,异位内膜VEGF的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=34.124,P<0.001),在位内膜VEGF的表达高于正常内膜,差异具有统计学意义(χ~2=26.415,P<0.001)。2.Western blot结果2.1实验组异位内膜和在位内膜ERαIOD值分别为(593.92±8.14)、(623.46±13.19),均高于对照组正常内膜的IOD值(455.13±18.86),差异均具有统计学意义(t=33.098,P<0.05;t=35.829,P<0.05);实验组内,在位内膜ERαIOD值高于异位内膜,差异具有统计学意义(t=9.337,P<0.05)。对照组正常内膜ERα表达强度具有周期性特点,且增生期(469.92±11.29)高于分泌期(440.33±11.80),差异具有统计学意义(t=6.277,P<0.05);而实验组均无此周期性变化特点:异位内膜(增生期:595.17±7.64,分泌期:592.67±8.78;t=0.745,P=0.464),在位内膜(增生期:625.17±12.86,分泌期:621.75±13.86;t=0.626,P=0.538)。2.2实验组异位内膜和在位内膜ERβIOD值分别为(645.21±8.86)、(642.83±6.86),均高于对照组正常内膜的IOD值(438.21±31.25),差异具有统计学意义(t=38.134,P<0.05;t=38.567,P<0.05);实验组内,异位内膜与在位内膜ERβIOD值比较,差异无统计学意义(t=1.038,P=0.305)。对照组正常内膜ERβ表达强度具有周期性变化特点,且增生期(460.17±10.07)高于分泌期(417.58±14.64),差异具有统计学意义(t=8.300,P<0.05);而实验组均无此周期性变化特点:异位内膜(增生期:646.08±10.58,分泌期:644.33±7.11;t=0.476,P=0.639),在位内膜(增生期:643.08±7.49,分泌期:642.58±6.50;t=0.175,P=0.863)。2.3实验组异位内膜和在位内膜IOD值的ERβ/ERα比值分别为(1.087±0.231)、(1.032±0.258),均高于对照组正常内膜(0.964±0.349),差异具有统计学意义(t=14.347,P<0.05;t=7.606,P<0.05);实验组内,异位内膜IOD值的ERβ/ERα比值(1.087±0.231)高于在位内膜(1.032±0.258),差异具有统计学意义(t=7.786,P<0.05)。2.4实验组异位内膜和在位内膜c-Jun IOD值分别为(622.29±9.02)、(618.70±9.79),均高于对照组正常内膜的IOD值(428.58±14.86),差异具有统计学意义(t=28.22,P<0.05;t=51.56,P<0.05);实验组内,异位内膜与在位内膜c-Jun IOD值比较,差异无统计学意义(t=1.310,P=0.197)。对照组正常内膜c-Jun表达强度具有周期性变化特点,且增生期(439.25±12.05)高于分泌期(417.92±8.25),差异具有统计学意义(t=53.59,P<0.05);而实验组均无此周期性变化特点:异位内膜(增生期:625.00±10.41,分泌期:619.58±6.78;t=1.511,P=0.145),在位内膜(增生期:621.83±9.01,分泌期:616.92±10.97;t=1.199,P=0.243)。2.5异位内膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值呈现负相关,具有统计学意义(r=-0.555,P<0.05),而在位内膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值的相关性(r=-0.008),正常内膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值的相关性(r=0.233),均无统计学意义(P=0.971,P=0.274)。2.6实验组异位内膜和在位内膜VEGF IOD值分别为(613.21±9.62)、(612.14±8.50),均高于对照组正常内膜的IOD值(430.67±22.39),差异均具有统计学意义(t=36.70,P<0.05;t=37.12,P<0.05)。实验组内,异位内膜与在位内膜ERβIOD值比较,差异无统计学意义(t=0.413,P=0.618)。对照组正常内膜VEGF表达强度具有周期性变化特点,且增生期(449.92±10.87)高于分泌期(411.42±11.02),差异具有统计学意义(t=8.616,P<0.05);而实验组均无此周期性变化特点:异位内膜(增生期:615.75±8.80,分泌期:610.67±10.10;t=1.314,P=0.202),在位内膜(增生期:613.75±9.23,分泌期:610.50±7.75;t=0.934,P=0.360)。2.7 IOD值的ERβ/ERα比值和VEGF IOD值的相关性在异位内膜(r=-0.225)、在位内膜(r=0.127)和正常内膜(r=0.327),均无统计学意义(P=0.292,P=0.553,P=0.119)。结论1.EMT患者在位内膜中,ERα高表达;异位内膜中,ERβ的作用高于ERα。2.EMT患者的异位内膜和在位内膜中,AP-1和VEGF均高表达,且ERβ和ERα的比值与AP-1呈负相关,AP-1和VEGF在EMT的发展中起重要作用。3.正常内膜中ERα、ERβ、AP-1和VEGF表达强度呈现周期性特点,且增生期高于分泌期;而EMT异位内膜和在位内膜,这些蛋白的表达强度均无此周期性变化,提示EMT内膜细胞的生物学行为发生改变。