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目的:基于应激性高血压大鼠模型初步探讨心肌细胞内质网应激相关蛋白活性变化及缓压乐的干预作用。
方法:(1)120只鼠龄6～8周的SPF级雄性Wistar大鼠，喂养7天为适应期，按照随机分组方法分为实验组（48只）、正常组（12只）、阴性对照组Ⅱ（12只）、高、中、低剂量缓压乐(HYL)干预组（各12只）及阳性对照组（12只）。实验组大鼠应用间断足底电、噪音和光等复合应激因素刺激12周，并用尾动脉血压鉴定是否成功构建模型，12周后实验组大鼠经模型鉴定，将造模成功的实验大鼠（36只）随机分为应激性高血压(stress induced hypertention，SIH)模型组（12只）、阴性对照组Ⅰ（12只）和HYL治疗组（12只），处理SIH模型组和正常组，取心脏组织，而阴性对照组Ⅰ和HYL治疗组继续干预4周，阴性对照组Ⅰ大鼠以灌胃蒸馏水进行干预（1ml/100g体质量，1次/d）。HYL治疗组大鼠以灌胃高剂量缓压乐复方制剂进行干预（0.1g/100g体质量，1次/d），同时在干预期间每天用间断足底电、噪音和光持续刺激并通过尾动脉血压进行疗效评价，干预4周后处理各组大鼠，取心脏组织，检测相关指标;阴性对照组Ⅱ以灌胃蒸馏水进行干预（1ml/100g体质量，1次/d），高、中、低剂量HYL干预组大鼠以灌胃缓压乐复方制剂（分别为0.1g/100g、0.05g/100g、0.025g/100g体质量，1次/d）进行干预，阳性对照组大鼠以灌胃依普利酮(eplerenone，Ep1)进行干预（5mg/100g体质量），干预12周，同时各组大鼠在干预期间每天用间断足底电、噪音和光等复合应激因素刺激12周，并通过尾动脉血压进行疗效评价，干预12周以后处理全程干预各组，取心脏组织，检测相关指标;(2)采用RT-qPCR和免疫组织化学法，分别检测正常组、SIH模型组、阴性对照组Ⅰ和HYL治疗组大鼠心脏组织PKC-α、SERCA-2a、c-fos及c-jun基因mRNA表达，SERCA-2a蛋白表达和PLB、c-jun的磷酸化水平。(3)采用Western-bloting方法检测全程干预各组大鼠心脏组织PLB总蛋白表达，PLB、IRE-1及c-jun的磷酸化水平。
结果:(1)与正常组相比，SIH模型组大鼠血压明显升高(P＜0.05)，PKC-α基因mRNA表达水平上调(P＜0.05)，SERCA-2a蛋白表达和PLB磷酸化水平下调(P＜0.05)，c-jun磷酸化水平上调(P＜0.05)，SERCA-2a、c-fos及c-jun基因mRNA表达水平没有显著性差异(P＞0.05);(2)与阴性对照组Ⅰ相比，HYL治疗组大鼠血压下降，PLB磷酸化水平明显上调(P＜0.05)，c-jun磷酸化水平明显下降（P＜0.05），PKC-α基因mRNA表达和SERCA-2a蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05);(3)与正常组相比，全程干预各组大鼠心脏组织PLB总蛋白表达不存在差异(P＞0.05)，阴性对照组Ⅰ大鼠心脏组织内PLB磷酸化水平降低，IRE-1和c-jun的磷酸化水平均上升(P＜0.05)。与阴性对照组Ⅱ相比，高剂量HYL干预组和阳性对照组PLB磷酸化水平上升(P＜0.05)，而IRE-1和c-jun的磷酸化水平均降低(P＜0.05)。与正常组相比，高剂量HYL干预组、阳性对照组大鼠心脏组织PLB、IRE-1和c-jun的磷酸化水平的差异不明显(P＞0.05);
结论:(1)本研究所建立的SIH模型大鼠心肌细胞发生内质网应激;(2)高剂量缓压乐复方制剂可以逆转和防止SIH模型大鼠心肌细胞内质网应激。
方法:(1)120只鼠龄6～8周的SPF级雄性Wistar大鼠，喂养7天为适应期，按照随机分组方法分为实验组（48只）、正常组（12只）、阴性对照组Ⅱ（12只）、高、中、低剂量缓压乐(HYL)干预组（各12只）及阳性对照组（12只）。实验组大鼠应用间断足底电、噪音和光等复合应激因素刺激12周，并用尾动脉血压鉴定是否成功构建模型，12周后实验组大鼠经模型鉴定，将造模成功的实验大鼠（36只）随机分为应激性高血压(stress induced hypertention，SIH)模型组（12只）、阴性对照组Ⅰ（12只）和HYL治疗组（12只），处理SIH模型组和正常组，取心脏组织，而阴性对照组Ⅰ和HYL治疗组继续干预4周，阴性对照组Ⅰ大鼠以灌胃蒸馏水进行干预（1ml/100g体质量，1次/d）。HYL治疗组大鼠以灌胃高剂量缓压乐复方制剂进行干预（0.1g/100g体质量，1次/d），同时在干预期间每天用间断足底电、噪音和光持续刺激并通过尾动脉血压进行疗效评价，干预4周后处理各组大鼠，取心脏组织，检测相关指标;阴性对照组Ⅱ以灌胃蒸馏水进行干预（1ml/100g体质量，1次/d），高、中、低剂量HYL干预组大鼠以灌胃缓压乐复方制剂（分别为0.1g/100g、0.05g/100g、0.025g/100g体质量，1次/d）进行干预，阳性对照组大鼠以灌胃依普利酮(eplerenone，Ep1)进行干预（5mg/100g体质量），干预12周，同时各组大鼠在干预期间每天用间断足底电、噪音和光等复合应激因素刺激12周，并通过尾动脉血压进行疗效评价，干预12周以后处理全程干预各组，取心脏组织，检测相关指标;(2)采用RT-qPCR和免疫组织化学法，分别检测正常组、SIH模型组、阴性对照组Ⅰ和HYL治疗组大鼠心脏组织PKC-α、SERCA-2a、c-fos及c-jun基因mRNA表达，SERCA-2a蛋白表达和PLB、c-jun的磷酸化水平。(3)采用Western-bloting方法检测全程干预各组大鼠心脏组织PLB总蛋白表达，PLB、IRE-1及c-jun的磷酸化水平。
结果:(1)与正常组相比，SIH模型组大鼠血压明显升高(P＜0.05)，PKC-α基因mRNA表达水平上调(P＜0.05)，SERCA-2a蛋白表达和PLB磷酸化水平下调(P＜0.05)，c-jun磷酸化水平上调(P＜0.05)，SERCA-2a、c-fos及c-jun基因mRNA表达水平没有显著性差异(P＞0.05);(2)与阴性对照组Ⅰ相比，HYL治疗组大鼠血压下降，PLB磷酸化水平明显上调(P＜0.05)，c-jun磷酸化水平明显下降（P＜0.05），PKC-α基因mRNA表达和SERCA-2a蛋白表达水平无明显变化(P＞0.05);(3)与正常组相比，全程干预各组大鼠心脏组织PLB总蛋白表达不存在差异(P＞0.05)，阴性对照组Ⅰ大鼠心脏组织内PLB磷酸化水平降低，IRE-1和c-jun的磷酸化水平均上升(P＜0.05)。与阴性对照组Ⅱ相比，高剂量HYL干预组和阳性对照组PLB磷酸化水平上升(P＜0.05)，而IRE-1和c-jun的磷酸化水平均降低(P＜0.05)。与正常组相比，高剂量HYL干预组、阳性对照组大鼠心脏组织PLB、IRE-1和c-jun的磷酸化水平的差异不明显(P＞0.05);
结论:(1)本研究所建立的SIH模型大鼠心肌细胞发生内质网应激;(2)高剂量缓压乐复方制剂可以逆转和防止SIH模型大鼠心肌细胞内质网应激。