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目的探讨外分泌的GRP78和细胞膜表面EGFR相互作用的情况,确定外分泌GRP78和EGFR在肝癌细胞产生索拉非尼耐药过程中的作用及其机制,根据外分泌GRP78含量的不同以及其产生的耐药机制的原理,将其作为临床诊断的标志和治疗的靶点。方法1.用蛋白质印迹分析各肝癌细胞外分泌GRP78的含量和细胞表面EGFR的表达,并选择合适的细胞株。2.收集肝癌患者的血清和正常人的血清,利用ELISA分析肝癌患者血清中GRP78含量和正常人血清中GRP78含量的差异。3.在细胞水平检测rh GRP78是否影响索拉非尼对肝癌细胞的敏感性及其作用机制。利用MTT,Western blot,GST pull down和集落形成实验分析rh GRP78存在情况下肝癌细胞对索拉非尼敏感性的影响和rh GRP78与EGFR相互作用产生耐药性的信号传导通路。4.在动物水平建立肿瘤模型,并将动物分为三组,rh GRP78组,索拉非尼组和rh GRP78+索拉非尼组,采用灌胃方式进行治疗,一段时间后取出小鼠肿瘤组织进行瘤体称重和免疫组化检测,比较三组结果的差异。结果1.GRP78可以由HCC细胞分泌2.外分泌的GRP78促进细胞增殖并抑制索拉非尼诱导的细胞凋亡3.分泌的GRP78与EGFR相互作用并诱导其活化4.EGFR介导HCC细胞对分泌的GRP78的反应结论由肿瘤细胞分泌的GRP78可以以自分泌或旁分泌的方式激活EGFR-Src-STAT3信号通路导致肝癌细胞对索拉非尼的耐药。并且EGFR决定HCC细胞对外分泌GRP78的反应性