论文部分内容阅读
目的 制备PEG修饰的唑来膦酸(Zoledronic acid,ZOL)脂质体(Liposomes,LPs),通过建立鼠源性成纤维细胞(3T3)与乳腺癌细胞(4T1)共培养模型,考察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)坎地沙坦对鼠源性成纤维细胞的调节作用,探讨坎地沙坦对长循环唑来膦酸脂质体(PEG-ZOL-LPs)抗肿瘤的增效作用。方法 1.以DSPE-PEG2000-NH2,卵磷脂和胆固醇为载体材料,采用薄膜分散法制备PEG-ZOL-LPs。透射电镜观察外观表征,光子相关光谱法测定平均粒径和Zeta电位,HPLC法测定包封率和载药量。2.培养鼠源性成纤维细胞(3T3)后给予坎地沙坦(20、40、60、80 μmol·L-1)作用24h、48h、72h,以酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定Ⅰ型胶原、透明质酸及转化生长因子β(TGF-β)含量。采用Transwell小室构建3T3与乳腺癌细胞(4T1)共培养模型,研究3T3细胞给予坎地沙坦后对4T1细胞侵袭能力的影响。3.通过构建乳腺癌细胞裸鼠模型,对裸鼠肿瘤重量和体积,血清中Ⅰ型胶原、透明质酸和TGF-β1含量进行测定,研究坎地沙坦干预后对PEG-ZOL-LPs抗肿瘤作用的影响。结果 Ⅰ.PEG-ZOL-LPs的外观呈圆形或类圆形,大小均匀,平均粒径为(227±11.03)nm,Zeta 电位为(0.027±0.010)mV,包封率为(25.11±4.56)%及载药量为(0.43±0.08)%。符合预期要求,稳定性好,符合肿瘤血管内递药需求。2.通过细胞实验发现,坎地沙坦(20、40、60、80 μmol·L-1)在给药24h、48h、72h后对3T3分泌Ⅰ型胶原、透明质酸及TGF-β1均有下降趋势,且表现为浓度依赖性,提示坎地沙坦对3T3具有调节作用。同时,与空白对照组比较,给予坎地沙坦(40、60、80μmol·L-1)对4T1细胞的迁移能力显著降低,差异有统计学意义(p<0.05或p<0.01)。结果表明,坎地沙坦呈剂量依赖性抑制乳腺癌细胞侵袭能力,随着给药浓度的增加,细胞侵袭能力逐渐降低。3.通过动物实验发现,坎地沙坦联合长循环唑来膦酸组与其他实验组相比,对肿瘤具有更强的抑制作用,差异具有统计学意义(p<0.05),且优于长循环唑来膦酸组(p<0.05)。与对照组,坎地沙坦组和PEG-ZOL-LPs组相比,坎地沙坦联合PEG-ZOL-LPs组裸鼠血清中Ⅰ型胶原、透明质酸和TGF-β1含量显著下降,具有统计学差异(p<0.05或p<0.01)。结论 本研究通过PEG-ZOL-LPs制备,发现PEG-ZOL-LPs平均粒径、Zeta电位、包封率及载药量等均符合预期,稳定性好。通过选择不同剂量的坎地沙坦,研究坎地沙坦对鼠源性成纤维细胞的调节作用,发现坎地沙坦可以减少成纤维细胞合成细胞外基质,并能够抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。通过构建坎地沙坦与PEG-ZOL-LPs序贯给药方法,建立鼠源性成纤维细胞(3T3)与乳腺癌细胞株(4TI)共培养模型,发现坎地沙坦可以通过抑制TGF-β1的生成,同时降低基质Ⅰ型胶原蛋白和透明质酸的产生,减少PEG-ZOL-LPs在肿瘤组织的渗透障碍。通过肿瘤体积的变化可知,坎地沙坦联合PEG-ZOL-LPs的抗肿瘤效果优于坎地沙坦组或PEG-ZOL-LPs组。这些结果表明,坎地沙坦是具有调节细胞外基质作用的,可以提高抗肿瘤药物的治疗效果,为开发新型抗肿瘤纳米制剂提供基础。