【摘 要】
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泛素一蛋白酶体途径是真核细胞中重要的蛋白降解途径,与细胞的诸多生理活动的关系密切,对免疫系统有重要影响。本实验选取我国重要经济动物中国明对虾作为实验材料,克隆了中
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泛素一蛋白酶体途径是真核细胞中重要的蛋白降解途径,与细胞的诸多生理活动的关系密切,对免疫系统有重要影响。本实验选取我国重要经济动物中国明对虾作为实验材料,克隆了中国明对虾泛素(ubiquitin, Ub)cDNA部分序列,长478 bp,其中包含完整的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF),长度为234 bp,编码77个氨基酸,推导的氨基酸序列与已知其他物种Ubs具有95%以上的同源性(identity),说明其进化上非常保守。Ub的理论pI值为6.56,分子量为8.69kDa。Ub分子中含量最高的氨基酸为Leu(11.69%)其次是Gl、Ile、Lys、Thr(9.09%),带正电荷氨基酸残基(Arg+Lys)总数11,带负电荷氨基酸残基(Asp+Glu)总数为11,不含Cys和Trp。预测Ub的3D模型为球型结构,蛋白中有一个α-螺旋和两个反式β-折叠,C端成无规卷曲游离于球型结构之外,与已知泛素结构相似。疏水性分析发现蛋白亲水性较高。本实验选用温度诱导表达载体pBV221,成功构建重组质粒pBV221-Ub,转化大肠杆菌BL21,经42℃诱导,成功表达了Ub蛋白。中国明对虾泛素原核表达的成功为进一步研究中国明对虾体内泛素基因功能奠定了基础。
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