宽叶独行菜的耐逆性研究和遗传转化

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宽叶独行菜广泛分布于我国华北与西北地区,在国外亦分布于美国西部,新英格兰海岸,墨西哥、加拿大、澳大利亚等地。这种原产于欧洲东南部的杂草在许多栖息地具有极强的竞争力,特别是在河岸湿地地区。宽叶独行菜在不同的生态环境下具有广泛的适应力。国外的对它的研究主要集中在它的高度耐涝性,而在国内的分布显示它对干旱、盐、低温与高温生境有很强的适应能力。因此研究它对逆境的广谱适应机制具有重要的科学意义。本文利用采自我国青海荒漠地区干旱盐渍生境的宽叶独行菜种子,进行了耐盐耐旱的基础生理研究,并为建立遗传转化体系而进行了组织培养研究。本实验进行了盐胁迫下种子的萌发情况测定。实验结果表明,随着盐浓度的增加,种子的萌发率及发芽势呈不断下降的趋势,萌发活力指数也受到抑制。在相同盐浓度情况下,宽叶独行菜的种子萌发率和萌发活力指数远高于拟南芥。宽叶独行菜种子萌发阶段可耐受盐浓度范围为0-200mmol/L,而拟南芥种子萌发可耐受的盐浓度范围为0-100 mmol/L。在较高浓度的NaCl胁迫后宽叶独行菜仍然保持较高的种子萌发率和萌发活性,而拟南芥种子却几乎不能萌发。实验研究了不同浓度NaCl胁迫下宽叶独行菜的生理响应。结果表明,随着盐浓度的升高,干扰了植物体内的离子平衡,趋势是叶片中的Na+含量不断上升,而K+含量则不断下降,K+/Na+值逐渐降低。在盐胁迫处理之后,宽叶独行菜的叶片相对含水量下降,蒸腾速率和光合速率下降,叶片中叶绿素含量降低,叶片变黄,根系生长受到抑制等。实验还通过与盐芥和拟南芥相对比,结果显示,在盐胁迫处理下,宽叶独行菜表现出良好的耐盐性,拟南芥对盐胁迫最敏感,耐盐性最差。本实验以宽叶独行菜的种子、子叶作外植体,以附加30.0g/L蔗糖和7.0g/L琼脂的MS培养基为基本培养基。实验目的是希望发现一个宽叶独行菜的组织培养的优化体系。不同组合的生长调节剂(6-BA、2,4-D、NAA、ZT、IAA )被用来进行愈伤组织和不定芽的诱导。结果表明,激素对子叶切块愈伤组织诱导的影响是很明显的。2,4-D对于愈伤组织不定芽的诱导是必不可少的。在不添加2,4-D的培养基中,外植体的愈伤组织诱导率很低,并且需要诱导很长的时间。在添加2,4-D的培养基中,外植体愈伤组织的诱导率几乎达到了100%,但2,4-D浓度过大会导致愈伤组织变成黄色,这样很不利于芽的诱导,适宜的2,4-D浓度为0.5 mg/L。诱导不定芽再生的激素以BA1mg/L+NAA 0.25mg/L为宜。此外,NAA对生根有明显的促进作用。
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