目的:研究过表达孕激素受体B,可增强子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE对孕激素类药物醋酸甲羟孕酮的敏感性,为临床子宫内膜癌孕激素保守治疗提供理论依据。方法:先提取子宫内膜癌细胞Ishikawa的RNA,逆转录为c DNA作为模板,设计PRB的CDS区全长的特异性引物并对目的片段进行扩增,然后将目的片段产物克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体中,再将连接产物转化到DH5α感受态细胞,在预先制备好的LB选择性固体培养基(含氨苄)中进行培养,挑阳性克隆经300 rpm,培养12-16 h后,经双酶切及测序鉴定,构建pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体。体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE,将构建好的pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体转染至Ishikawa和KLE细胞中,运用Real-time PCR、Western blot技术检测转染后Ishikawa和KLE中PRB m RNA和蛋白的表达变化,来确定是否构成PRB过表达的细胞系。然后用醋酸甲羟孕酮来处理转染前后子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE,用CCK-8法、划痕实验和单克隆形成实验来检测细胞增殖活性和侵袭能力。最后通过统计,来分析PRB的表达对醋酸甲羟孕酮处理子宫内膜癌细胞的敏感性的影响。结果:1、利用PCR扩增PRB的CDS序列片段并克隆到p CD3.1(+)质粒载体中,成功构建了pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体。2、经Real-time PCR结果显示,Isk-pcDNA3.1(+)-NC组(转染空载体)和Isk-pcDNA3.1(+)-PRB组(转染pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体)PRB的m RNA水平分别为(1.56±0.74)、(40.38±6.72),Isk-pcDNA3.1(+)-PRB组PRB的m RNA表达升高,与Isk-pcDNA3.1(+)-NC组相比,差异有统计学意义(p<0.0001)。KLE-pcDNA3.1(+)-NC组(转染空载体)和KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组(转染pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体)PRB的m RNA水平分别为(1.89±0.52)、(51.27±11.38),KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组PRB的m RNA表达升高,与KLE-pcDNA3.1(+)-NC组相比差异有统计学意义(p<0.0001)。3、经Western blot的结果显示,Isk-pcDNA3.1(+)-NC组和Isk-pcDNA3.1(+)-PRB组的PRB蛋白表达水平分别为(0.71±0.05)和(1.05±0.07),Isk-pcDNA3.1(+)-PRB组与Isk-pcDNA3.1(+)-NC组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。KLE-pcDNA3.1(+)-NC组和KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组的PRB蛋白表达水平分别为(0.18±0.01)和(0.70±0.03),KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组与KLE-pcDNA3.1(+)-NC组相比,差异有统计学意义(p<0.01)。4、用醋酸甲酸孕酮处理Ishikawa和KLE细胞,CCK-8结果显示,Isk-pcDNA3.1(+)-PRB组(64.12±1.37)相比较于Isk-pcDNA3.1(+)-NC组(42.21±1.67)细胞抑制率增高(p<0.01),KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组(39.88±2.22)相比较于KLE-pcDNA3.1(+)-NC组(15.04±1.34)细胞抑制率增高(p<0.001)。单克隆形成实验结果显示,醋酸甲羟孕酮处理细胞之后,Ishikawa-pcDNA3.1(+)-PRB组和KLE-pcDNA3.1(+)-PRB组较空载体组相比,单克隆细胞数量均减少。划痕实验显示,Ishikawa-pcDNA3.1(+)-PRB组与Ishikawa-pcDNA3.1(+)-NC组相比,细胞迁移率减少(13.81±0.60 vs 22.06±0.84,p<0.01),KLE-pcDNA3.1(+)-PRB与KLE-pcDNA3.1(+)-NC组相比,细胞迁移率减少(15.66±1.07 vs 24.60±2.31,p<0.01)。结论:1、成功构建了pcDNA3.1(+)-PRB的重组质粒载体,并提高了孕激素受体B在子宫内膜癌Ishikawa细胞和KLE细胞中的表达。2、过表达孕激素受体B,可以提高子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE对于醋酸甲羟孕酮的敏感性。