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TGF-β作为细胞增殖的调节因子,在支持细胞增殖调节中发挥了重要作用,但详细机制特别是miRNA在这一过程中的作用仍不清楚。本实验以20日龄左右的仔猪睾丸为材料,利用体外培养的仔猪睾丸支持细胞研究了以下几个问题：(1) TGF-β是否通过Smad依赖途径或非Smad依赖途径调节睾丸支持细胞增殖；(2) TGF-β在通过smad途径调节细胞增殖的过程中是否调节了P15、P21、c-Myc、Skp2的表达；(3) TGF-β是否可以调节miRNA-24的水平影响Smad的活性,进而影响支持细胞增殖。本实验先用17β-雌二醇处理培养的支持细胞不同时间,利用ELISA检测支持细胞中TGF-β的分泌量。然后通过CCK-8与流式细胞术检测TGF-β处理不同时间对支持细胞增殖和周期的影响。接着,用TGF-β处理支持细胞不同时间,用Western blotting检测Smad3、ERK1/2、PI3K的表达情况。用LY2109761、U0126和10-DEBC预处理培养的支持细胞,再用流式细胞术检测细胞增殖的情况,用CCK-8检测细胞的活率。在此基础上,用LY2109761 (TGF-β/smad抑制剂)预处理支持细胞,以Western blotting和荧光定量PCR (RT-PCR)检测P15、P21蛋白和c-Myc、Skp2基因表达的变化。最后TGF-P处理支持细胞不同时间,通过荧光定量PCR (RT-PCR)检测ssc-miRNA-24表达的变化。并设计miR-24上调和下调序列及NC对照,将其分别转染后用TGF-β处理支持细胞,通过western blotting检测Smad3活性的变化；通过荧光定量PCR (RT-PCR)检测c-Myc、Skp2基因表达的变化,通过CCK8检测细胞成活。实验结果发现：(1)雌激素(1x10-9 mo1/L)以时间依赖的方式促进了支持细胞TGF-p的分泌。(2) TGF-β (0-300 pg/mL)以时间剂量依赖的方式调节了细胞的活率,浓度为180pg/mL,24 h时细胞增殖显著。180 pg/mL TGF-β以时间依赖的方式调节了细胞的进程,在24 h时效果最明显。(3) TGF-β以时间依赖方式抑制Smad3磷酸化,同时诱导ERK1/2, PI3K的磷酸化,U0126 (5.0umol/L),10-DEBC (2.0umol/L)和LY2109761均抑制了TGF-β诱导的支持细胞的活率和细胞周期的进程,而且三者具有叠加效应。(4) TGF-β (180pg/mL)在支持细胞中抑制了P15、P21蛋白的表达,促进了c-myc mRNA、Skp2 mRNA的表达,而LY2109761抑制了这些蛋白的表达。(5) TGF-β(180pg/mL)以时间依赖方式促进ssc-miRNA-24表达,24h时达到最高。ssc-miRNA-24 mimics抑制了Smad3蛋白活性,促进了c-Myc、Skp2 mRNA表达,ssc-miRNA-24 inhibitor增强了Smad3蛋白活性,降低了c-Myc、Skp2 mRNA表达水平。综上所述,在仔猪睾丸支持细胞中,雌激素可以促进支持细胞分泌TGF-β。 TGF-β可通过影响ssc-miRNA-24的表达调节Smad3通路和活性,从转录后水平抑制P15、P21蛋白表达,促进c-Myc与Skp2 mRNA表达调控细胞生长,同时,TGF-β也可以通过激活ERK1/2、PI3K信号通路,参与支持细胞增殖调节。