【摘 要】
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沙门氏菌是一种重要的人畜共患致病菌,给人类及畜禽养殖业的安全造成严重危害。抗生素是治疗沙门氏菌感染的有效药物,但由于其不当使用导致沙门氏菌耐药性问题愈发凸显,研发
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沙门氏菌是一种重要的人畜共患致病菌,给人类及畜禽养殖业的安全造成严重危害。抗生素是治疗沙门氏菌感染的有效药物,但由于其不当使用导致沙门氏菌耐药性问题愈发凸显,研发新型抑菌药物成为函待解决的问题。非抗生素舍曲林因其低毒性和抑菌特性,可作为一种潜在的临床抑菌药物。本论文通过对肉类食品中分离的沙门氏菌的耐药程度进行分析并确定其抗生素耐药基因的分布;选取具有四环素耐药性的沙门氏菌为研究对象,探究非抗生素药物舍曲林对其四环素耐药性和毒力的影响,阐明舍曲林对沙门氏菌的抑菌机制,为耐药沙门氏菌的控制提供新思路。主要研究结果如下:(1)研究肉类食品中沙门氏菌的耐药情况及耐药基因分布。首先采用药敏纸片扩散法研究9株沙门氏菌对23种抗生素的耐药性。测试结果表明,实验菌株全部为多重耐药菌,其中有3株沙门氏菌至少对8种以上抗生素耐药。最低抑菌浓度(MIC)的测定结果表明,多种抗生素的MIC值均超过美国临床和实验室标准协会所制定的药敏标准值,其中四环素、氯霉素、克拉霉素的MIC值高达256μg/m L。此外,沙门氏菌对舍曲林的MIC为16-32μg/m L。耐药基因的分析表明,耐药菌株携带四环素类耐药基因tet A、tet C、tet D,霉素类耐药基因flo R、cat,氨基糖苷类耐药基因aad A2、str A、str B。综合实验结果说明肉类食品中分离的沙门氏菌耐药性较广泛,且耐药程度较高。(2)以对四环素耐药的沙门氏菌为主体,探究舍曲林对沙门氏菌四环素耐药性及运动性的影响。体外生长活力测定结果表明,低浓度舍曲林(0.2μg/m L)作用下沙门氏菌的体外生长活力无明显变化,1/2 MIC浓度的舍曲林可有效降低沙门氏菌的体外生长活力。在低浓度舍曲林(0.2μg/m L)作用下,通过透射电镜观察发现沙门氏菌形态无明显变化,但测定其运动性发现沙门氏菌聚集运动能力显著降低。与四环素单独作用相比,舍曲林与四环素的联用对细菌聚集运动的抑制作用更为显著。基于棋盘法的MIC测定结果表明,舍曲林可增加耐药菌株对四环素的敏感性,且与四环素联用表现出相加抑菌效果。(3)研究舍曲林对沙门氏菌III型分泌系统(T3SS)相关毒力基因和细菌侵袭性的影响,探究舍曲林抑菌机制。实时荧光定量PCR测定结果显示,舍曲林对T3SS的毒力基因hil A、inv F、prg H的转录有显著的抑制作用。舍曲林与四环素联用后对毒力基因表达的抑制作用与四环素单独作用组相比无明显差别。测定细菌侵袭性发现,低浓度舍曲林(0.2μg/m L)显著降低沙门氏菌对Hela细胞的侵袭能力。因此,舍曲林可在临床允许浓度下抑制沙门氏菌毒力基因的表达,降低沙门氏菌的侵袭能力,进而降低其毒性。
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