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[目的]
采用高浓度的D-半乳糖持续皮下注射小鼠,建立小鼠老年痴呆模型,并使用脑复康、阿司匹林、水杨酸、抗衰老1号等药物进行治疗,通过morris水迷宫训练、生化检测、病理组织切片、骨生物力学检测等手段观察小鼠学习、记忆能力,测定血清、脑超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)活性,观察大脑海马区组织形态和小鼠右股骨平均最大载荷值,观察药物对老年痴呆小鼠模型的干预作用。
[方法]
选取4月龄雌性小鼠60只,体重(29.5±2.04)g,随机分为6组:正常对照组(Cont),模型组(D-Gal),模型+脑复康组(D+NFK),模型邯可司匹林组(D+ASP),模型+水杨酸组(D+SYS)和模型+抗衰老1号组(D+KSL1),每组10只小鼠。于实验开始时,正常对照组(Cont):生理盐水灌胃和皮下注射对照;模型组(D-Gal):D-半乳糖皮下注射120mg·kg-1·d-1,生理盐水灌胃;模型+脑复康组(D+NFK):D-半乳糖皮下注射120mg·kg-1·d-1,脑复康按0.54g·kg-1·d-1灌胃给药;模型+可司匹林组(D+ASP):D-半乳糖皮下注射120mg·kg-1·d-1,阿司匹林按7.5mg·kg-1·d-1灌胃给药;模型+水杨酸组(D+SYS):D-半乳糖皮下注射120mg·kg-1·d-1,水杨酸按6mg·kg-1·d-1灌胃;模型+抗衰老1号组(D+KSL1):D-半乳糖皮下注射120mg·kg-1·d-1,抗衰老1号(含人参皂苷150mg、原儿茶醛37.5mg、维生素E50mg)按35.6mg·kg-1·d-1灌胃给药。各组小鼠饲养条件相同,平均每6d记录一次体重情况,实验为期55d(含观察期)。
实验第45天分别随机抽取各组4个小鼠进行morris水迷宫练习。实验结束时,小鼠眼球取血处死,分离血清作生化指标(超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT及丙二醛MDA)活性测定;取左脑组织,石蜡包埋,连续切片,HE染色进行海马区形态学分析,取右脑组织做脑匀浆测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA);分离右股骨作生物力学三点弯曲试验。
[结果]
1长期高浓度的D-半乳糖持续皮下注射小鼠可致小鼠老年性痴呆
1.1在Morris水迷宫的定航实验中,模型组与正常对照组比较2,3,4d平均潜伏期比正常对照组长(P<0.01);在空间探索实验中,模型组第一象限平均路程和时间百分比也有降低的趋势,提示模型组小鼠学习记忆能力明显下降。
1.2血清指标测试结果显示,模型组与正常对照组相比,血清SOD升高(P<0.05),血清CAT浓度及MDA浓度无统计学意义。
1.3脑匀浆指标测试结果显示,模型组脑匀浆SOD浓度比正常对照组低(P<0.05),MDA浓度无统计学意义。
1.4脑切片观察结果显示,与正常对照组相比,模型组海马区细胞蓝染深,细胞层薄稀疏,细胞核变小且不规则,着色不均匀,有核固缩,边缘有细胞凋亡现象。
1.5骨生物力学平均最大载荷实验结果显示,与正常对照组相比,模型组平均最大载荷稍高,但无统计学意义。
2脑复康有减轻D-半乳糖所致小鼠老年性痴呆的作用
2.1在Morris水迷宫的定航实验中,脑复康组与模型组比较1,2,3,4d平均潜伏期比正常对照组短(P<0.01);在空间探索实验中,脑复康组第一象限平均路程和时间百分比也有增高的趋势,提示学习记忆能力明显升高。
2.2血清指标测试结果显示,与模型组相比,脑复康组血清SOD、CAT浓度升高,血清MDA浓度降低,但均无统计学意义。
2.3脑匀浆指标测试结果显示,脑复康组脑匀浆SOD浓度,MDA浓度比模型组低,但均无统计学意义。
2.4脑切片观察结果显示,脑复康组脑海马区切片细胞与模型组相比,海马区细胞较完整,为圆形或椭圆形,结构清晰,着色为浅蓝紫色,细胞形态规则,细胞间隙小,细胞数目较多,排列整齐,坏死细胞较少。
2.5骨生物力学平均最大载荷实验结果显示,脑复康组骨生物力学的平均最大载荷比模型组高(P<0.05)。
3阿司匹林也有减轻D-半乳糖所致小鼠老年性痴呆的作用
3.1在Morris水迷宫的定航实验中,阿司匹林组与模型组比较3,4,5d平均潜伏期短(第3,4dP<0.01,第5d P<0.05);在空间探索实验中,阿司匹林组第一象限平均路程和时间百分比也有增高的趋势(P<0.01),提示学习能力明显升高。
3.2血清指标测试结果显示,与模型组相比,阿司匹林组血清SOD、CAT浓度升高,血清MDA浓度降低,但均无统计学意义。
3.3脑匀浆指标测试结果显示,阿司匹林组脑匀浆SOD浓度比模型组稍低,MDA浓度比模型组低,但均无统计学意义。
3.4脑切片观察结果显示,阿司匹林组脑海马区切片细胞与模型组相比,细胞较完整,着色为浅蓝紫色,细胞形态规则,细胞间隙小,细胞数目较多,排列较整齐。
3.5骨生物力学平均最大载荷实验结果显示,阿司匹林组骨生物力学的平均最大载荷比正常对照组(P<0.05)和模型组稍高。
4水杨酸对D-半乳糖所致小鼠老年性痴呆无明显影响
4.1在Morris水迷宫的定航实验中,与模型组相比,水杨酸组小鼠学习能力无明显提高;水杨酸组与脑复康组比较1,2,3平均潜伏期比正常对照组长(P<0.01)。
4.2血清指标测试结果显示,与模型组相比,水杨酸组血清SOD降低,血清MDA浓度升高,但均无统计学意义,血清CAT浓度升高(P<0.05)。
4.3脑匀浆指标测试结果显示,水杨酸组脑匀浆SOD浓度比模型组低(P<0.05);MDA浓度比模型组低(P<0.01)。
4.4脑切片观察结果显示,与正常对照组相比,水杨酸组脑海马区切片细胞蓝染深,细胞层较薄,细胞形态不规则,细胞间隙明显增大,细胞数目较少。
4.5骨生物力学的平均最大载荷实验结果显示,水杨酸组骨生物力学的平均最大载荷比模型组稍高(P<0.01)。
5抗衰老1号对D-半乳糖所致小鼠老年性痴呆模型有明显影响
5.1在Morris水迷宫的空间探索实验中,与模型组相比,抗衰老1号组小鼠第一象限平均路程和时间百分比有增高的趋势。
5.2血清指标测试结果显示,与模型组相比,抗衰老1号血清SOD、CAT浓度升高,MDA血清浓度降低,但均无统计学意义。
5.3脑匀浆指标测试结果显示,抗衰老1号组SOD浓度比模型组稍低,但无统计学意义;MDA浓度比模型组低,且具有统计学意义(P<0.05)。
5.4脑切片观察结果显示,抗衰老1号组脑海马区切片细胞较完整,为圆形或椭圆形,结构清晰,着色为浅蓝紫色,细胞形态规则,细胞间隙小,细胞数目较多,排列整齐,边缘较少坏死细胞。
5.5骨生物力学的平均最大载荷实验结果显示,抗衰老1号骨生物力学的平均最大载荷比模型组稍高,但无统计学意义。
[结论]
1长期高浓度的D-半乳糖持续皮下注射小鼠可致小鼠老年痴呆;
2脑复康、阿司匹林、抗衰老1号对D-半乳糖所致小鼠老年痴呆模型有积极干预作用,水杨酸无明显干预作用。