海藻糖联合磷酸盐冷冻保存血小板的实验研究

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目的观察-80℃条件下海藻糖联合磷酸盐对人单采血小板的保护作用,并了解海藻糖联合磷酸盐对血小板的长期保存(3个月)效果。方法人单采血小板分别以三种不同低温保护剂(6% DMSO、2% DMSO联合TS、海藻糖联合磷酸盐)于-80℃条件下冷冻保存,并于冷冻保存1周、1个月及3个月后解冻,体外检测并比较各组的血小板计数、低渗休克反应率、聚集功能、凋亡状态,以及观察海藻糖联合磷酸盐冷冻保存血小板的超微结构。结果(1)海藻糖负载前后血小板凋亡率分别为(1.3±0.5)%和(1.9±1.1)% (P>0.05)。(2)以单纯海藻糖(未添加磷酸盐)和以海藻糖联合磷酸盐冻存3个月血小板的凋亡率分别为(11.6±3.9)%和(6.4±0.9)% (P<0.05)。(3)以海藻糖联合磷酸盐冻存的血小板,冻存1周、1个月和3个月后的计数分别为(905±52)×106、(920±50)×106和(880±55)×106,三种方法冻存的血小板不同保存时间段的计数之间无显著差异(P>0.05)。(4)以海藻糖联合磷酸盐冻存的血小板,冻存1周、1个月和3个月时的低渗休克反应率分别为(53.5±8.0)%、(51.3±7.8)%和(50.1±8.8)%,各冻存时间段的低渗休克反应率都显著高于同一时间段另外两组血小板(P<0.05)。(5)以海藻糖联合磷酸盐冻存的血小板,冻存1周、1个月和3个月时的最大聚集率分别为(34.3±3.0)%、(32.7±3.5)%和(31.3±3.0)%,各冻存时间段的最大聚集率都显著高于同一时间段另外两组血小板(P<0.05)。(6)以海藻糖联合磷酸盐冻存的血小板,冻存1周、1个月和3个月时的凋亡率分别为(2.8±0.9)%、(6.0±2.2)%和(6.4±0.9)%,各冻存时间段的凋亡率都显著低于同一时间段另外两组血小板(P<0.05)。(7)海藻糖联合磷酸盐冻存3个月内的血小板仍能保持相对完整的超微结构及部分颗粒。结论血小板负载海藻糖的过程不会促进血小板的凋亡;海藻糖保存血小板时,联合应用磷酸盐在抑制血小板凋亡方面的效果优于单独应用海藻糖;海藻糖联合磷酸盐冻存血小板的长期效果较稳定,其维持血小板回收率的效果与6%DMSO及2% DMSO联合TS相同,维持血小板低渗休克反应、聚集功能及抑制血小板凋亡的效果优于6%DMSO及2%DMSO联合TS,并能较好地维持血小板的超微结构。
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