背景与目的慢性胃炎和消化性溃疡的是人类常见病、多发病，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是其重要病因，Hp也与胃癌和黏膜相关样淋巴组织淋巴瘤有一定的相关性。1994年，Hp被世界卫生组织正式列为第一类致癌原(GroupⅠcarcinogen)，美国疾病预防和控制中心也将Hp感染性疾病列为近年新出现的传染病。随着抗生素在根除Hp治疗中的广泛应用，Hp耐药株的发生率不断上升，而Hp耐药菌株的出现是导致治疗失败的主要原因。由于各地区抗生素应用品种及习惯的差异等，耐药率在不同国家和地区也会有所不同，因此重视对抗生素耐药菌株的监测和研究，不仅可以了解Hp耐药状况，指导临床用药，而且可以克服其耐药性，提高根除率，避免耐药株的产生。本研究通过体外检测胃黏膜分离培养的Hp，观察本院Hp对阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素和甲硝唑的耐药情况，为临床根除Hp的抗生素选择提供依据，并探讨Hp菌株对克拉霉素的耐药可能机制。材料与方法(1)菌株的来源和培养：内镜常规方法取胃肠疾病患者的胃黏膜组织块，涂抹法接种于改良布氏培养基上，37℃恒温培养箱微需氧环境培养3～6d。对菌落进行菌落形态观察和生化反应(触酶试验、氧化酶试验和尿素酶试验)，取阳性者传代。菌种保存于—80℃。(2)药敏实验：将纯培养的Hp调至6×10~7CFU／ml菌悬液，涂布在改良布氏羊血平板上，贴上药敏纸片，放入培养箱37℃培养4d后，测量抑菌环大小。(3)DNA提取：收集纯培养4d的Hp菌株，采用酚-氯仿法提取其DNA，-20℃保存备用。(4)Hp 23SrRNA基因的PCR-RFLP分析：PCR扩增Hp 23SrRNA基因中含有A2142G和A2143G的基因片段，1.5％的琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物，在300bp位置有一条带者，进一步用限制性内切酶BbsI(A2142G)和BsaI(A2143G)酶切，1％的琼脂糖凝胶电泳观察谱型，记录结果。结果(1)菌株的耐药率：43株Hp菌株中对阿莫西林耐药的有4株(9.3％)，对克拉霉素耐药的有8株(18.6％)，对甲硝唑耐药的有23株(53.5％)，未发现对呋喃唑酮耐药菌株；对克拉霉素和甲硝唑共同耐药的有5株，对阿莫西林和甲硝唑共同耐药的有1株。(2)PCR-RFLP：43株Hp 23SrRNA基因中含有A2142G和A2143G的基因片段经PCR扩增后，产物长度300bp，进一步将PCR产物用BbsI(A2142G)和BsaI(A2143G)酶切后，8株对克拉霉素耐药Hp菌株中有7株其PCR产物经BsaI酶切后分别得到200bp、100bp的两个片段，1株对克拉霉素耐药Hp菌株经BsaI酶切后得到一个300bp片段，8株对克拉霉素耐药Hp菌株其PCR产物经BbsI酶切后均分别得到一个300bp片段；对29株对克拉霉素敏感的Hp菌株分别进行BbsI和BsaI酶切，均分别得到一个300bp片段。结论(1)本研究中HP菌株对甲硝唑耐药比较普遍，对克拉霉素有一定的耐药性，对阿莫西林仍敏感，未发现对呋喃唑酮的耐药HP菌株。但是已经出现对两种抗生素耐药的菌株。建议今后在根除Hp治疗中合理应用抗菌药物。(2)23SrRNA基因A2143G点突变与Hp对克拉霉素的耐药明显相关。