论文部分内容阅读
1目的高血压是威胁人类健康的主要疾病之一。在我国,导致众多高血压患者发病的主要因素之一在于高钠、低钾饮食。肾脏是人体非常重要的器官,它在调节血压的同时,又是高血压损害的主要靶器官之一。我国因为高血压而造成肾脏损伤的患者人数在近几年不断增加。因此,研究高血压引起的肾脏损伤,对控制高血压以及保护肾脏有着非常重要的意义。本课题通过复制DOCA-高盐高血压模型,在此模型基础上研究葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins,GSP)对DOCA-高盐诱导高血压大鼠肾脏组织损伤的影响并探讨其可能的作用机制。2方法雄性SD大鼠,清洁级,体重180-200g,54只,随机分为7组:双肾对照组(Sham组)、单肾对照组(Un X-sham组)、DOCA-高盐高血压组(DOCA-salt组)、GSP低剂量组(GSP150组)、GSP中剂量组(GSP240组)、GSP高剂量组(GSP384组)、氨氯地平组。除Sham组外,其余大鼠均摘除左侧肾脏,3天后皮下注射DOCA 120 mg·kg-1,每周1次,同时饮用含0.2%KCl和1%Na Cl的高盐水,持续4wk,复制DOCA-高盐高血压大鼠模型。各治疗组大鼠分别给予不同浓度GSP或氨氯地平(Amlodipine besylate tablets,ALM)灌胃,每天1次,持续4wk;对照组和模型组的大鼠给予等容积的超纯水灌胃。每周收集一次大鼠的尿液,共4wk,采用BCA法测定大鼠尿蛋白浓度。4wk后,大鼠在末次给药后禁食不禁水12 h,腹腔注射10%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉,腹主动脉取血。处死大鼠后,迅速取出右侧肾脏,记录肾重并计算肾重指数。HE染色和VG染色分别观察肾脏的病理学改变和纤维化程度。采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清中血肌酐(Serum creatinine,Scr)、尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)的含量。比色法测定血清中尿酸(Uric Acid,UA)、肾脏组织中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量。碱水解法测定肾脏组织中羟脯氨酸(Hydroxyproline,Hyp)的含量。Western blot法检测肾脏组织中JNK和p38蛋白表达及其磷酸化水平。3结果Sham组与Un X-Sham组相比,除肾重指数升高外,其他各项指标差别均无统计学意义。给予大鼠皮下注射DOCA及高盐饮水4wk后,模型组大鼠肾脏重量和肾脏重量指数较对照组明显增加(P<0.01)。给予大鼠GSP和氨氯地平实验治疗后,GSP低、中、高剂量组、氨氯地平组大鼠的肾脏重量及肾重指数均明显降低。HE染色结果显示,模型组大鼠肾小球面积明显增大(P<0.01),肾小球纤维样增生硬化。给予GSP和ALM实验治疗后,GSP低、中、高剂量组、氨氯地平组大鼠肾小球面积明显降低(P<0.01)。与对照相比,模型组肾脏组织胶原容积分数(CVF)和羟脯氨酸(Hyp)含量增加,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,GSP低、中、高剂量组、氨氯地平组肾脏组织的CVF和Hyp含量降低,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。造模3wk后,DOCA-salt组大鼠尿液中蛋白含量便已经出现明显升高(P<0.05)。与DOCA-salt高血压大鼠相比,GSP中剂量、高剂量组,氨氯地平组大鼠尿液中蛋白含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,DOCA-高盐高血压模型组大鼠血清BUN、Scr和UA含量有增加的趋势,但差异无统计学意义。GSP低剂量、中剂量、高剂量组、氨氯地平组给药4wk后,有抑制血清BUN、Scr和UA含量升高的趋势,但差异无统计学意义。与Unx-sham组相比,DOCA-salt组的大鼠肾脏组织中MDA含量明显升高,SOD含量明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01)。而给予不同剂量GSP和ALM实验治疗4wk后,可明显抑制肾脏组织中SOD含量降低和MDA水平的升高(P<0.01)。DOCA-salt高血压大鼠肾脏组织中p-p38的表达明显升高(P<0.01),给予GSP和ALM实验治疗4wk后,GSP中、高剂量组可以明显抑制大鼠肾脏组织中p-p38的高表达(P<0.05)。与Unx-sham相比,DOCA-高盐高血压模型组大鼠肾脏组织中p-JNK表达有升高的趋势,但差异无统计学意义。GSP低剂量、中剂量、高剂量组、氨氯地平组给药4wk后,有抑制p-JNK升高的趋势,但差异无统计学意义。4结论GSP能明显改善DOCA-高盐诱导的大鼠肾脏损伤以及肾脏重构,其机制可能与降低机体氧化应激水平,抑制ROS-p38/JNK信号转导通路过度活化有关。