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目的和意义：
脑缺血及脑损伤是严重威胁人类生命健康的多发病，其主要的病理损害是神经元的损伤和缺失，导致神经功能缺损。直到上世纪90年代，神经再生与神经干细胞(neural stem cells，NSCs)的发现为中枢神经系统损伤的修复带来了希望。NSCs具有强大的增殖能力和多分化潜能，病理情况下，内、外源性的NSCs能够增殖并向病灶区迁移，最终分化成各种类型的神经元和神经胶质细胞，以修复损伤的神经系统。但研究发现内、外源性NSCs的存活、增殖能力有限，并且易分化为胶质细胞；而微环境对NSCs的增殖、分化起着决定性作用。因而，如何调控NSCs的增殖及分化方向，是应用NSCs治疗神经系统疾病之前急需解决的问题。近年来研究发现，核因子-κKB(nuclea factor-kappa B，NF—κ B)信号系统与中枢神经系统疾病发生发展密切相关，并且可能参与了NSCs增殖分化的调控，但其确切机制尚不清楚。
本实验通过观察NF—κB信号通路激活剂(肿瘤坏死因子α，tumor necrosisfactoT-alpha，TNF-α)、NF—κ B信号通路抑制剂(四氢化吡咯二硫代氨基甲酸盐，pylTollidine dithiocarbamate，PDTC)对体外培养的NSCs增殖状况的影响，探讨NF—κB在NSCs增殖过程中的调控作用；同时初步探讨稀土化合物氯化镧(Lanthanum chloride，LaCl3)对体外培养的NSCs增殖状况的可能影响，以进一步了解NSCs增殖分化的调控机制，为更好地利用NSCs治疗神经系统疾病提供理论依据。
方法：
1、小鼠神经干细胞(mouse neural stem cells，mNSCs)的分离培养及鉴定：
采用成球悬浮法分离培养mNSCs，至第三代后，行细胞冰冻切片，免疫组化方法鉴定NSCs标志蛋白nestin。
2、实验分组：将生长状态良好的第3代mNSCs分为空白对照组、TNF—α组、PDTC组，分别采用常规NSCs培养液、含10ng／mL,TNF—α的NSCs培养液、含0．1mmol／1 PDTC的NSCs培养液培养30分钟、4小时和72小时；另设一组氯化镧组，以含氯化镧2．5μmol／L的NSCs培养液培养NSCs1～3天。
3、观察指标及方法：采用免疫荧光细胞化学方法及’Western Blooting方法检测NSCs NF—κ B活化状况(即P65在细胞中的分布变化)；采用免疫荧光细胞化学方法检测与细胞增殖相关的指标(包括cyclinD1、Ki-67)及神经球计数、神经球体积测量方法观察NSCs的增殖状况。
结果：
1、mNSCs的生长状况及鉴定结果：mNSCs原代培养时，镜下见培养2天后细胞分裂增殖逐渐形成呈悬浮生长的形态规则的神经球，球周边不断有分裂增殖的细胞凸出。5～7天后球体积不断增大，球中央的细胞因营养缺乏而逐渐变黑，予以传代。免疫细胞荧光法鉴定神经球中大部分为Nestin表达阳性细胞。
2、NSCs的NF—κB活化状况：细胞免疫荧光染色结果显示，TNF—α组可见明显的p65活化由胞浆转位至胞核；而PDTC组P65仍表达在胞浆，未见核转位。
Western Blotting结果显示，TNF—α组胞核NF—κB／p65蛋白含量显著高于对照组，而PDTc组胞核p65蛋白含量极少。结果表明，TNF—α能使mNSCs NF—κB活化。
3、NSCs的增殖状况：神经球计数和神经球体积测量结果显示，TNF—α组和氯化镧(2．5μmot／L)组神经球数量分别为[(74．56±2．6)个／瓶]和[(62．32±2．8)个／瓶]，较对照组[(42．28±3．5)个／瓶]明显增多，P<0．05；神经球体积分别为[(0．82±0．16)×106(μm3)]和[(0．66±0．12)x 106(μm3)]，较对照组[(0．26±0．08)×106(μm3)]明显增大，P<0．05。细胞免疫荧光染色结果显示，TNF—α组和空白对照组中，CyclinDl阳性细胞率分别为(68．6±4．2)％和(38．8±3．7)％，明显高于PDTC组的(24．2±2．8)％，p<0．01；Ki-67阳性细胞率分别为(48．2±3．6)％和(35．2±4．7)％，明显高于PDTC组的(18．7±1．8)％，p<0．01。
以上研究结果表明，TNF—Q可使mNSCsNF—κB活化，并促进NSCs增殖；PDTC能抑制mNSCs NF—κB的活化，从而抑制NSCs增殖；一定浓度的氯化镧可促进mNSCs增殖。
结论：
1、NF—κB的激活或抑制可促进或抑制NSCs的增殖，NF—κB在NSCs的增殖过程中可能起着重要的调控作用。
2、一定浓度的氯化镧具有促进Nscs增殖的作用。