高危型HPV感染、DNMT1表达和DAPK基因启动子甲基化状态在宫颈病变中相关性的研究

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目的:1.检测宫颈病变细胞中DNMT1蛋白表达状态和抑癌基因DAPK启动子区的甲基化状态,探讨其在宫颈病变发生发展中的作用;2.探讨高危型HPV的感染、DNMT1表达和DAPK启动子区甲基化状态间的相互关系,可进一步了解宫颈病变的发生机制,对该病早期筛查及病情发展的监测提供帮助。方法:1.研究对象随机选择2011年1月至2011年12月我院妇科门诊患者中均行TCT和阴道镜检查的150例患者,根据阴道镜宫颈活检的病理诊断结果,分为子宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)30例,子宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINⅡ)30例,子宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)30例,鳞状细胞癌(SCC)30例作为研究组;另取未见恶性细胞和上皮内病变细胞(NILM)30例为对照组。2.检测高危型HPV-DNA感染情况取患者的TCT剩余标本,提取DNA,SPR方法检测高危型HPV,运用生物传感芯片阅读仪读取高危型HPV-DNA感染情况。3.检测DNMT1蛋白表达状态取上述所选患者的TCT剩余标本(保存期不超过3周),经Thinprep2000系统重新制片1张,置于95%酒精中室温固定24小时,空气中晾干,置冰箱4℃储存备用拟行DNMT1蛋白的免疫细胞化学检测。显微镜下观察细胞图片,细胞质及细胞间质出现棕褐色颗粒者为阳性。4.检测抑癌基因DAPK启动子区的甲基化状态取入组患者的TCT剩余标本,采用MSP技术,检测患者宫颈脱落细胞DAPK基因启动子区的甲基化状况。摄像观察8% PAGE上电泳结果:获得甲基化产物,无论是否出现非甲基化产物,均判定为甲基化阳性;只出现非甲基化产物判定为甲基化阴性;甲基化产物与非甲基化产物均未获得判定该标本实验失败。5.统计学分析采用SPSS18.0软件包进行统计分析,检验水准α= 0.05。结果:1. 150例宫颈各病变阶段宫颈脱落细胞中高危型HPV-DNA的检测情况:高危型HPV感染阳性率为80.67%(121∕150),随着病变程度的进展,各组间高危型HPV感染率存在统计学差异(χ2=30.658,P<0.05),且呈现出增高的趋势(趋势χ2=30.658,P<0.05)。2.宫颈病变各阶段DNMT1蛋白检测结果:NILM组6.67%;CINⅠ组56.67%;CINⅡ组63.33%;CINⅢ组66.67%;SCC组76.67%。DNMT1蛋白在各宫颈病变阶段组中的阳性表达率差异有显著性(P﹤0.05),且随着病变程度的进展,DNMT1蛋白表达率呈现出增高的趋势(P﹤0.05)。3.本实验中随着病变程度的进展,DAPK基因启动子区CpG岛的甲基化率分别为3.33%、10.00%、13.33%、46.67%、60.00%,各组间有显著性差异(P<0.05),且呈现出增高的趋势(P<0.05)。4.在宫颈病变的过程中,高危型HPV感染、DNMT1蛋白表达与DAPK基因甲基化两两间相关系数分别为0.340、0.214、0.444,互呈正相关(P均< 0.05)。结论:随着宫颈病变级别的升高,高危型HPV持续性感染、DNMT1蛋白异常高表达、DAPK抑癌基因的异常高甲基化,各指标间可能存在相互间的促进关系,可以为宫颈病变的发现和病变程度的监测提供新思路、新方法。
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