【摘 要】
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目的:通过体外实验,研究坏死性凋亡抑制剂（Necrostatin-1,Nec-1）能否在人近端肾小管上皮（Human kidney proximal tubular epithelial,HK-2）细胞受到高糖诱导的损伤情况下,对其产生保护作用及机制。方法:在体外对HK-2细胞株进行培养,将细胞随机分为5组:对照组（Control,CON）:5.5mmol/L葡萄糖、甘露醇组（Mannitol,M
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目的:通过体外实验,研究坏死性凋亡抑制剂（Necrostatin-1,Nec-1）能否在人近端肾小管上皮（Human kidney proximal tubular epithelial,HK-2）细胞受到高糖诱导的损伤情况下,对其产生保护作用及机制。方法:在体外对HK-2细胞株进行培养,将细胞随机分为5组:对照组（Control,CON）:5.5mmol/L葡萄糖、甘露醇组（Mannitol,MN）:5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇、Nec-1组（Necrostatin-1,Nec-1）:5.5mmol/L葡萄糖+100μmol/L Nec-1、高糖组（High glucose,HG）:30mmol/L葡萄糖和高糖+Nec-1组（High glucose+Necrostatin-1,HG+Nec-1）:30mmol/L葡萄糖+100μmol/L Nec-1,每组分别处理24小时后,各组细胞活力采用细胞增殖-毒性检测法（CCK-8）检测;各组细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的生成采用二氯二氢荧光素双醋酸盐（DCFH-DA）法结合流式细胞法检测;选用流式细胞法检测细胞凋亡率;超氧化物歧化酶2（Superoxide dismutase 2,SOD2）、NADPH氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）、单核细胞趋化蛋白-1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl2-associated X,Bax）、受体相互作用蛋白1（Receptor interaction protein 1,RIP1）和受体相互作用蛋白3（Receptor interaction protein 3,RIP3）的表达选取免疫印迹法进行测定。结果:与CON组和MN组相比,HG组HK-2细胞活力降低,ROS的生成增加,SOD2蛋白表达降低,NOX4、MCP-1蛋白表达增加,细胞凋亡率增加,Bcl-2/Bax蛋白表达降低,RIP1和RIP3蛋白表达增加（均P<0.01）;与HG组相比,HG+Nec-1组细胞活力增加,ROS生成减少,SOD2蛋白表达增加,NOX4、MCP-1蛋白表达降低,细胞凋亡率下降,Bcl-2/Bax蛋白表达升高,RIP1和RIP3蛋白表达降低（均P<0.01）,差异均具有统计学意义。结论:Necrostatin-1对高糖诱导的HK-2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与Nec-1抗氧化应激、抑制炎症反应、抗凋亡以及抑制坏死性凋亡有关。
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