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背景:
耐药或晚期卵巢癌治疗效果不尽人意，挖掘安全有效的抗耐药卵巢癌中药意义重大。前期发现雷公藤内酯醇(Triptolide，TP/TPL)能抑制耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞生长，促进其凋亡，并增加其对顺铂(Cisplatin，DDP)的敏感性。但TPL仅作为实验用品应用于科研，尚未能用于患者的临床治疗，临床上广泛应用的雷公藤制剂为雷公藤多苷（Tripterygium glycosides，GTW）。而GTW是否也具有与TPL类似的抗耐药卵巢癌作用？前期进一步发现GTW能抑制SKOV3/DDP细胞侵袭迁移，增加SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性，但其作用机制不明。
目的:
探讨GTW对SKOV3/DDP细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。为GTW临床应用于耐药或晚期上皮性卵巢癌化疗增敏或辅助治疗提供实验室依据。
方法:
1.将4-8周雌性裸鼠随机分为5组:①正常对照组;②阴性对照组（荷瘤裸鼠不给药）;③DDP组;④GTW组;⑤DDP+GTW组，给药期间每日观察并记录各组实验裸鼠的一般状况。
2.给药期间每两天利用游标卡尺测量皮下移植瘤体积，给药14天后，利用电子分析天平测量皮下移植瘤重量。
3.利用ELISA实验检测各组荷瘤裸鼠血清肿瘤标志物CA125、HE4的水平。
4.利用免疫组化实验检测各组皮下移植瘤组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Fas、P53和Bax的表达情况。
5.利用TUNEL实验检测各组皮下移植瘤组织中细胞的凋亡情况。
6.利用Western blot实验检测各组皮下移植瘤组织中ILK、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、E-Cadherin、N-Cadherin、Slug蛋白的表达情况。
7.统计学处理:计量数据结果以均数±标准差表示。采用GraphPad Prism7.0软件系统处理数据，应用t检验比较两组间差异，应用单因素方差分析比较多组间差异。P＜0.05表示差异具有统计学意义。
结果:
1.给药期间，无裸鼠死亡。与正常组对照组相比，阴性对照组裸鼠精神萎靡，活动减少，饮食饮水量减少;DDP组、GTW组和DDP+GTW组裸鼠精神好，活动正常，饮食饮水量无明显改变。
2.给药期间每两日测量各组裸鼠皮下移植瘤并得到相应体积，给药第14天时发现，各药物组与阴性对照组相比，皮下移植瘤体积显著减小(P＜0.05)。联合组与单药组相比，皮下移植瘤体积无显著差异(P＞0.05)。
称重皮下移植瘤质量发现，各药物组与阴性对照组相比，给药14天后皮下移植瘤质量显著减轻(P＜0.05)。联合组与单药组相比，给药14天后皮下移植瘤质量无显著差异(P＞0.05)。
3.ELISA检测各组荷瘤裸鼠血清肿瘤标志物CA125、HE4水平发现，各药物组与阴性对照组相比，用药14天后，血清肿瘤标志物CA125、HE4水平显著降低(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，血清肿瘤标志物CA125、HE4水平显著降低(P＜0.05)。
4.免疫组化实验检测各组皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2累计光密度发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2表达和Bcl-2/Bax的比值显著降低(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2表达和Bcl-2/Bax的比值显著降低(P＜0.05)。
免疫组化实验检测各组皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53累计光密度发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达显著增加(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达显著增加(P＜0.05)。
5.TUNEL染色检测各组皮下移植瘤中细胞凋亡率发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中细胞凋亡率显著增加(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中细胞凋亡率显著增加(P＜0.05)。
6.Western bolt实验检测各组皮下移植瘤组织中ILK、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、E-Cadherin、N-Cadherin、Slug蛋白的表达情况示:以GAPDH和β-Tublin作为内参蛋白，ILK、N-Cadherin、Slug蛋白在皮下移植瘤组织中的表达，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，其表达显著降低(P＜0.05)，联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，其表达显著降低(P＜0.05);AKT/p-AKT、GSK3β/p-GSK3β及E-Cadherin蛋白在皮下移植瘤组织中的表达，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，其表达显著增加(P＜0.05)，联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，其表达显著增加(P＜0.05)。
结论:
1.GTW可协同DDP抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤的生长。
2.GTW可协同DDP降低荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠血清肿瘤标记物CA125和HE4的水平。GTW具有协同DDP抗耐顺铂人上皮性卵巢癌的作用。
3.GTW可协同DDP降低耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤组织中凋亡相关蛋白:Bcl-2及Bcl-2/Bax，增加凋亡相关蛋白:Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达。GTW协同DDP促进耐顺铂人上皮性卵巢癌凋亡的作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。
4.GTW可协同DDP促进耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤组织中细胞的凋亡。
5.GTW抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤生长，并促进其凋亡的作用机制与ILK/GSK3β/Slug信号通路有关。
耐药或晚期卵巢癌治疗效果不尽人意，挖掘安全有效的抗耐药卵巢癌中药意义重大。前期发现雷公藤内酯醇(Triptolide，TP/TPL)能抑制耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞生长，促进其凋亡，并增加其对顺铂(Cisplatin，DDP)的敏感性。但TPL仅作为实验用品应用于科研，尚未能用于患者的临床治疗，临床上广泛应用的雷公藤制剂为雷公藤多苷（Tripterygium glycosides，GTW）。而GTW是否也具有与TPL类似的抗耐药卵巢癌作用？前期进一步发现GTW能抑制SKOV3/DDP细胞侵袭迁移，增加SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性，但其作用机制不明。
目的:
探讨GTW对SKOV3/DDP细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。为GTW临床应用于耐药或晚期上皮性卵巢癌化疗增敏或辅助治疗提供实验室依据。
方法:
1.将4-8周雌性裸鼠随机分为5组:①正常对照组;②阴性对照组（荷瘤裸鼠不给药）;③DDP组;④GTW组;⑤DDP+GTW组，给药期间每日观察并记录各组实验裸鼠的一般状况。
2.给药期间每两天利用游标卡尺测量皮下移植瘤体积，给药14天后，利用电子分析天平测量皮下移植瘤重量。
3.利用ELISA实验检测各组荷瘤裸鼠血清肿瘤标志物CA125、HE4的水平。
4.利用免疫组化实验检测各组皮下移植瘤组织中凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Fas、P53和Bax的表达情况。
5.利用TUNEL实验检测各组皮下移植瘤组织中细胞的凋亡情况。
6.利用Western blot实验检测各组皮下移植瘤组织中ILK、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、E-Cadherin、N-Cadherin、Slug蛋白的表达情况。
7.统计学处理:计量数据结果以均数±标准差表示。采用GraphPad Prism7.0软件系统处理数据，应用t检验比较两组间差异，应用单因素方差分析比较多组间差异。P＜0.05表示差异具有统计学意义。
结果:
1.给药期间，无裸鼠死亡。与正常组对照组相比，阴性对照组裸鼠精神萎靡，活动减少，饮食饮水量减少;DDP组、GTW组和DDP+GTW组裸鼠精神好，活动正常，饮食饮水量无明显改变。
2.给药期间每两日测量各组裸鼠皮下移植瘤并得到相应体积，给药第14天时发现，各药物组与阴性对照组相比，皮下移植瘤体积显著减小(P＜0.05)。联合组与单药组相比，皮下移植瘤体积无显著差异(P＞0.05)。
称重皮下移植瘤质量发现，各药物组与阴性对照组相比，给药14天后皮下移植瘤质量显著减轻(P＜0.05)。联合组与单药组相比，给药14天后皮下移植瘤质量无显著差异(P＞0.05)。
3.ELISA检测各组荷瘤裸鼠血清肿瘤标志物CA125、HE4水平发现，各药物组与阴性对照组相比，用药14天后，血清肿瘤标志物CA125、HE4水平显著降低(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，血清肿瘤标志物CA125、HE4水平显著降低(P＜0.05)。
4.免疫组化实验检测各组皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2累计光密度发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2表达和Bcl-2/Bax的比值显著降低(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bcl-2表达和Bcl-2/Bax的比值显著降低(P＜0.05)。
免疫组化实验检测各组皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53累计光密度发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达显著增加(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中凋亡相关蛋白Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达显著增加(P＜0.05)。
5.TUNEL染色检测各组皮下移植瘤中细胞凋亡率发现，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，皮下移植瘤中细胞凋亡率显著增加(P＜0.05)。联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，皮下移植瘤中细胞凋亡率显著增加(P＜0.05)。
6.Western bolt实验检测各组皮下移植瘤组织中ILK、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、E-Cadherin、N-Cadherin、Slug蛋白的表达情况示:以GAPDH和β-Tublin作为内参蛋白，ILK、N-Cadherin、Slug蛋白在皮下移植瘤组织中的表达，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，其表达显著降低(P＜0.05)，联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，其表达显著降低(P＜0.05);AKT/p-AKT、GSK3β/p-GSK3β及E-Cadherin蛋白在皮下移植瘤组织中的表达，药物组与阴性对照组相比，用药14天后，其表达显著增加(P＜0.05)，联合组与DDP单药组、GTW单药组相比，用药14天后，其表达显著增加(P＜0.05)。
结论:
1.GTW可协同DDP抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤的生长。
2.GTW可协同DDP降低荷耐顺铂人上皮性卵巢癌裸鼠血清肿瘤标记物CA125和HE4的水平。GTW具有协同DDP抗耐顺铂人上皮性卵巢癌的作用。
3.GTW可协同DDP降低耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤组织中凋亡相关蛋白:Bcl-2及Bcl-2/Bax，增加凋亡相关蛋白:Bax、Cleaved caspase-3、Fas、P53的表达。GTW协同DDP促进耐顺铂人上皮性卵巢癌凋亡的作用机制与其调节凋亡相关蛋白的表达有关。
4.GTW可协同DDP促进耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤组织中细胞的凋亡。
5.GTW抑制耐顺铂人上皮性卵巢癌皮下移植瘤生长，并促进其凋亡的作用机制与ILK/GSK3β/Slug信号通路有关。