[目的]　　 通过运用耦联酶速率法测定血清ADA活性及用流式细胞术分析外周血T淋巴细胞亚群的表达，探讨肾脏疾病患者血清ADA活性水平及其T淋巴细胞亚群分布的相关性，从而评价肾脏疾病患者血清ADA与细胞免疫之间的关系。为临床在肾脏疾病不同阶段的诊断，治疗及预后方面提供一种有效的评价指标；对肾脏疾病的分期有重要的意义。　　 [方法]　　 1.耦联酶速率法测定腺苷脱氨酶的方法学评价：收集高、中、低不同活性浓度ADA的新鲜混合血清标本各1份(要求无明显黄疸、脂血和溶血)及收集200例健康成人血清：人员均为广东医学院附属医院体检中心的体检对象。经过体检排除HIV感染、近期病毒与细菌感染、无慢性器质性疾病、不接触化学毒物者、无免疫缺陷性疾病及近期未使用过对免疫系统有影响的药物患者。其中男性100例、女性100例，年龄18～65岁，对测定血清ADA的方法进行精密度、准确度、线性范围的评价和参考范围的建立。　　 2.健康成人外周血T淋巴细胞亚群参考区间的建立：收集标本均为广东医学院附属医院体检中心的体检对象。经过体检排除HIV感染、近期病毒与细菌感染、无慢性器质性疾病、不接触化学毒物者、无免疫缺陷性疾病及近期未使用过对免疫系统有影响的药物患者。本组共100例，其中男性50例、女性50例，年龄18～65岁，使用三标荧光抗体对不同年龄性别的健康成年人外周血T淋巴细胞亚群进行标记，采用EPICS XL/XL-MCL型流式细胞仪进行检测并分析结果。　　 3.肾脏疾病不同阶段患者血清ADA活性与外周血T淋巴细胞亚群的关系：选择在广东医学院附属医院肾病内科住院治疗的。肾脏疾病患者140例。按照病情不同分为氮质血症组、肾衰竭组和尿毒症组，其中氮质血症组50例：男性27例、女性23例，平均年龄45岁；肾衰竭组48例：男性24例、女性24例，平均年龄42岁；尿毒症组42例：男性22例、女性20例，平均年龄48岁。另选取同时期本院体检中心的体检对象作为对照组。经过体检排除HIV感染、近期病毒与细菌感染、无慢性器质性疾病、不接触化学毒物者、无免疫缺陷性疾病及近期未使用过对免疫系统有影响的药物患者。本组共50例，其中男性25例、女性25例，平均年龄45岁。各组间年龄比较无显著性差异，用全自动生化分析仪检测血清ADA和Scr、流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群分布情况，对各组间的差异进行评价。　　 [结果]　　 1.耦联酶速率法测定腺苷脱氨酶的方法学评价　　 1.1 ADA精密度试验：低、中、高浓度ADA活性水平批内(W-run)精密度中S(W-run)分别为0.38、0.73、1.21，批间(W-day)精密度中S(W-day)分别为0.52、0.79、1.82即S(W-run)和S(W-day)<1/4TEa；低、中、高浓度ADA活性水平批内(W-run)精密度中CV(％)分别为2.81、3.43、3.14，批间(W-day)精密度中CV(％)分别为3.80、3.41、4.59即CV(W-run)和CV(W-day)<5％。　　 1.2 ADA准确度试验：样本1、样本2、样本3的回收率(％)分别为91.3、93.4、97.1计算平均回收率及比例系统误差：　　 平均回收率=(91.3+93.4+97.1)/3×100％=93.9％　　 比例系统误差=100％-93.9％=6.1％　　 1.3 ADA干扰试验：当标本中含有32mg/dl胆红素、8.5mmol/L甘油三酯、8mg/dl维生素C时与无任何干扰物时血清ADA活性水平测定结果的差异无明显统计学意义(P>0.05)。　　 1.4 ADA线性范围试验：测定的线性范围为0～176U/L，与该试剂盒说明书标称值0～200U/L接近。　　 1.5 ADA正常参考区间的建立：对各组测试结果进行配对t检验发现男性、女性及不区分性别时的血清ADA活性水平之间的差异无统计学意义(P>0.05)。制定出本实验室血清ADA正常参考区间(()±2s)为11.0～16.4U/L。　　 2.健康成人外周血T淋巴细胞亚群的参考区间的建立　　 2.1男性、女性及不区分性别时外周血T淋巴细胞亚群百分数值通过t检验发现无统计学意义，由此可制定出本实验室CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+正常95％范围分别为59.17～76.15、24.26～40.50、18.76～27.40、0.62～2.42。　　 2.2用方差两两比较分析不同年龄段外周血T淋巴细胞亚群百分数值发现：(1)18～30年龄段与51～65年龄段CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均有统计学意义(P值分别为0.007、0.032、0.040、0.046)；(2)其他各年龄段的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+无统计学意义(P>0.05)。　　 2.3两两比较本实验测定的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与本试剂提供的参考区间及其他地区健康人外周血T淋巴细胞亚群百分数值分布发现：本实验测定各值与其他地区健康人差异无统计学意义(P>0.05)；本实验测定各值、其他地区健康人与本试剂提供的参考区间差异有统计学意义(P值分别为0.023、0.029)。　　 3.肾脏疾病患者血清ADA活性与外周血T淋巴细胞亚群的相关性　　 3.1将肾脏疾病患者按照病情不同分为氮质血症组、肾衰竭组、尿毒症组三个组，对不同组别的ADA活性病例进行统计分析，并与正常对照组进行比较。发现：与正常组比较，肾衰竭组ADA呈显著性升高(P<0.05)；尿毒症组ADA呈显著性降低(P<0.05)；而氮质血症组不升高(P<0.05)。　　 3.2将肾脏疾病患者按照病情不同分为氮质血症组、肾衰竭组、尿毒症组，分析不同组别患者外周血T淋巴细胞及亚群分布。可知，同正常对照组相比，氮质血症组、肾衰竭组CD3+、CD4+呈显著性升高(P<0.05)；而尿毒症组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+呈显著性降低(P<0.05)。　　 3.3通过对各组ADA与外周血T淋巴细胞亚群之间的相互关系进行统计学分析发现：在氮质血症组、肾衰竭组、尿毒症组中ADA与CD4+相关系数(r)分别为0.301、0.244、0.436及ADA与CD4+/CD8+相关系数(r)分别为0.324、0.442、0.563表明CD4+的升高与血清ADA的浓度有很大的正相关性。　　 [结论]　　 1.耦联酶速率法测定腺苷脱氨酶的方法学评价　　 1.1耦联酶速率法测定血清ADA活性水平的精密度(S(W-run)和S(W-day)<1/4Tea、CV(W-run)和CV(W-day)<5％)及准确度(比例系统误差为6.1％