原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是目前较为常见的恶性肿瘤之一,肿瘤转移复发是导致治疗切除后患者死亡的主要原因。然而转移过程十分复杂,涉及肿瘤细胞的黏附、迁移侵袭、金属基质蛋白酶的分泌和细胞外基质的降解等。因此,克服肝癌转移至关重要,GMI(Ganoderma microsporum immunomodulatory protein)是从小孢子灵芝菌丝体中分离得到的真菌免疫调节蛋白,多项研究表明GMI具有抗肿瘤、抗转移和抗炎症的能力,能抑制肺癌的侵袭转移,但未涉及对肝癌细胞的研究,因此本课题探讨GMI对肝癌细胞侵袭转移的影响及机制。目的:探讨小孢子灵芝免疫调节蛋白(GMI)对肝癌侵袭转移的影响及可能机制。方法:(1)四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测GMI对高转移人肝癌细胞SK-hep1,低转移人肝癌细胞HepG2的细胞毒性,并观察细胞形态变化;(2)集落形成实验检测GMI对集落形成的影响;(3)流式细胞术检测GMI对人肝癌细胞周期的影响;(4)划痕实验法检测GMI对人肝癌细胞运动能力的影响;(5)Transwell小室法检测GMI对人肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响;(6)qPCR检测GMI对人肝癌细胞N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug、Snail、C-myc、CyclinD1mRNA表达的影响;(7)Western Blot法及流式细胞术检测GMI对人肝癌细胞侵袭转移相关蛋白表达的影响;(8)建立裸鼠肝原位转移模型,在体内评价GMI对肝癌侵袭转移的影响。结果:(1)GMI在最高筛选浓度100μg/mL对HepG2 24h、48h、72h的抑制率分别为36.54%±5.14、51.28%±2.45、54.22%±7.43,对SK-hep1 24h、48h、72h的抑制率分别为31.93%±3.31、35.27%±2.16、52.66%±1.86,GMI能抑制人肝癌细胞的增殖,呈时间和浓度依赖性;(2)GMI浓度为4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL对HepG2集落形成抑制率为9.14%、41.73%、64.85%,对SK-hep1集落形成抑制率为17.83%、30.43%、51.01%,能抑制人肝癌细胞集落的形成;(3)GMI在高浓度可阻滞人肝癌细胞周期在G0/G1期,低浓度无明显影响;(4)GMI对HepG2的24h、48h的最大相对抑制迁移率分别为94.25%、88.93%,对SK-hep1的24h、48h的最大相对迁移抑制率分别为95.39%、96.12%,GMI可抑制人肝癌细胞的运动能力,并呈时间剂量依赖性;(5)Transwell法检测4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL GMI对HepG2的迁移抑制率分别为34.86%、41.03%、53.48%,对SK-hep1的迁移抑制率分别为48.23%、47.98%、66.91%,GMI可抑制人肝癌细胞的迁移能力,并随着浓度增加抑制效果增强;(6)Transwell法检测4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL GMI对HepG2的侵袭抑制率分别为0%、37.94%、40.67%,对SK-hep1的侵袭抑制率分别为9.82%、27.00%、47.69%,GMI可抑制人肝癌细胞的侵袭能力,随着浓度增加,侵袭抑制率增强;(7)GMI能抑制人肝癌细胞侵袭转移相关的N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Slug、Snail、C-myc、CyclinD1等蛋白和基因的表达;(8)高浓度剂量组4mg/kg的GMI能抑制肝原位肿瘤细胞的增长,延长肝原位裸鼠的生存期。结论:小孢子灵芝免疫调节蛋白(GMI)具有较强的体内外抗转移能力,其机制可能与降低N-cadherin和β-catenin的表达有关,继而逆转肝癌细胞的侵袭转移。