【摘 要】
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背景:主要组织相容性复合体Ⅰ（major histocompatibility complex-Ⅰ,MHC-Ⅰ）可将肿瘤相关抗原呈递至CD8+T细胞,诱导CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞。研究表明,肿瘤细胞表面MHC-Ⅰ表达下调是引起肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。因此影响MHC-Ⅰ组装和表达的关键蛋白,其异常表达有可能导致肿瘤免疫逃逸的发生。钙连接蛋白（Calnexin,CANX）在抗原提呈过程中作为伴侣
【基金项目】
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国家自然科学基金“线粒体核糖体蛋白L35影响结直肠癌发生发展的机制及逆转耐药的作用研究（编号:81972325）”2020年01月-2023年12月；
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背景:主要组织相容性复合体Ⅰ（major histocompatibility complex-Ⅰ,MHC-Ⅰ）可将肿瘤相关抗原呈递至CD8+T细胞,诱导CD8+T细胞杀伤肿瘤细胞。研究表明,肿瘤细胞表面MHC-Ⅰ表达下调是引起肿瘤免疫逃逸的重要机制之一。因此影响MHC-Ⅰ组装和表达的关键蛋白,其异常表达有可能导致肿瘤免疫逃逸的发生。钙连接蛋白（Calnexin,CANX）在抗原提呈过程中作为伴侣蛋白参与MHC-Ⅰ与抗原肽的装配,但CANX异常表达与肿瘤免疫逃逸的关系尚不清楚。目的:1.检测CANX在结直肠癌（colorectal cancer,CRC）患者癌及癌旁组织中的表达,分析CANX与CRC患者生存的相关性;2.分析CANX对MHC-Ⅰ的调控作用及对免疫细胞杀伤作用的影响。方法:TCGA（The Cancer Genome Atlas）数据分析458例CRC患者抗原加工和呈递机制（antigen processing machinery,APM）相关基因与患者总体生存期的相关性,并收集94对CRC患者的癌及配对的癌旁组织,制备组织芯片,免疫组化染色检测CANX的表达水平,进一步分析CANX表达与CRC患者总体生存期的相关性;利用c Bio Portal在线工具分析TCGA数据库CRC患者CANX和HLA-A、B、C表达的相关性。在两株差异表达CANX的CRC细胞LoVo和DLD-1中分别过表达和RNA干扰CANX,分析其对MHC-Ⅰ表达水平的影响;将过表达CANX的慢病毒感染小鼠结肠癌细胞CT-26,磁珠分选荷瘤小鼠的脾脏CD8+T细胞,利用细胞毒性试剂盒检测CD8+T细胞对CT-26的杀伤作用,ELISA测定细胞因子分泌的变化;多重荧光免疫组织化学进一步检测高、低表达CNAX的CRC患者组织中CD4、CD8、PD-1、LAG3、Foxp3的表达,分析肿瘤微环境中免疫细胞浸润情况。结果:TCGA数据分析表明CANX高表达与CRC患者总体生存期呈正相关;组织芯片染色结果表明CANX在结直肠癌组织的表达低于癌旁组织,CANX表达高,患者生存期长;c Bio Portal分析表明CRC患者CANX和HLA-A、B、C表达呈正相关。LoVo细胞过表达CANX后,MHC-Ⅰ的蛋白水平升高;RNA干扰DLD-1细胞CANX,MHC-Ⅰ表达水平下降。过表达CANX可增强CD8+T细胞对CT-26细胞的杀伤能力,且培养液中IFN-γ与TNF-α的分泌增加。CANX高表达的癌组织中,肿瘤微环境中浸润的CD8+T、CD4+T细胞多于CANX低表达癌组织,而CD8+PD-1+、CD4+Foxp3+细胞浸润情况则相反。结论:CANX通过正向调节MHC-I表达,促进肿瘤微环境中免疫细胞浸润,可能有助于抑制免疫逃逸,增加CRC患者的生存期。
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