【摘 要】
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背景与目的:前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)作为一个全球性问题危害着老年男性的生命,也是致使老年男性死亡的关键起因之一。目前关于前列腺癌发生的详细机制仍知之甚少。现
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背景与目的:前列腺癌(Prostate Cancer,PCa)作为一个全球性问题危害着老年男性的生命,也是致使老年男性死亡的关键起因之一。目前关于前列腺癌发生的详细机制仍知之甚少。现在随着肿瘤微环境关注度增加,成纤维细胞作为其中关键的间充质细胞引起了极大的关注。我们经过研究发现前列腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated Fibroblasts,CAF)与正常成纤维细胞(Normal Fibroblast,NF)比较呈现出更高水平的基础自噬。因此在许多疾病中靶向癌症相关成纤维细胞,尤其是癌症相关成纤维细胞的自噬可能是一种有效的治疗方法。本实验通过调节癌症相关成纤维细胞的自噬水平来研究其对前列腺癌细胞的作用,我们发现癌症相关成纤维细胞自噬促进前列腺癌细胞的进展。方法:首先通过免疫印迹分别检测正常成纤维细胞与癌症相关成纤维细胞自噬水平,接下来用自噬抑制剂氯喹抑制癌症相关成纤维细胞自噬,通过免疫印迹检测代表自噬水平的标志性蛋白LC-3Ⅱ进一步确认癌症相关成纤维细胞的自噬水平是否被抑制,然后分别与PC-3和DU-145细胞共培养,通过CCK-8增殖分析法与Transwell侵袭实验分别评估前列腺癌细胞(PC-3和DU-145)的增殖及侵袭能力。最后通过上调自噬起始基因Beclin-1上调癌症相关成纤维细胞自噬水平,通过免疫印迹确认基因Beclin-1与自噬水平是否上调,然后再次通过建立癌症相关成纤维细胞与前列腺癌细胞(PC-3和DU-145)共培养体系,通过CCK-8增殖分析法与Transwell侵袭实验分别评估前列腺癌细胞(PC-3和DU-145)的增殖及侵袭能力。最后通过免疫印迹检测代表前列腺癌细胞侵袭能力的相关蛋白表达水平(MMP-9和MMP-2)。结果:免疫印迹结果示癌症相关成纤维细胞中LC-3Ⅱ表达水平比正常成纤维细胞表达水平高,因此CAF的自噬水平高于NF。CAF自噬抑制后与前列腺癌细胞(PC-3和DU-145)共培养,CCK-8与Transwell的结果显示与自噬抑制后的CAF共培养的前列腺癌细胞的增殖、侵袭能力明显降低。通过病毒载体上调癌症相关成纤维细胞中自噬起始基因Beclin-1后,免疫印迹结果证明Beclin-1明显上调,同时CAF自噬水平也上调,共培养后发现前列腺癌细胞的增殖、侵袭及能力增强;免疫印迹结果示前列腺癌细胞中代表侵袭能力的相关蛋白(MMP-9和MMP-2)表达水平增高。结论:前列腺癌相关成纤维细胞(CAF)的自噬水平高于正常前列腺组织中成纤维细胞(NF)的自噬水平;癌症相关成纤维细胞的自噬促进前列腺癌细胞(PC-3和DU-145)增殖与侵袭。
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