【摘 要】
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前言 癫痫是中枢神经系统的常见病、多发病,其患病率约占全世界人口总数的0.5%,严重危害人类健康。大部分的癫痫都具有遗传性,而且遗传模式极为复杂。运用遗传学和分子生物学
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前言 癫痫是中枢神经系统的常见病、多发病,其患病率约占全世界人口总数的0.5%,严重危害人类健康。大部分的癫痫都具有遗传性,而且遗传模式极为复杂。运用遗传学和分子生物学的方法研究遗传性癫痫的进展十分迅速。谷氨酸、天冬氨酸是神经系统内最主要的兴奋性神经递质。已有研究表明,细胞外高水平的谷氨酸与癫痫的发生、发展有密切的联系。谷氨酸被释放到突触间隙作用于突触后膜上的受体后必须被快速的清除,而清除细胞外谷氨酸的唯一途径就是谷氨酸转运体蛋白介导的突触前神经末梢及胶质细胞的摄取。GLAST作为谷氨酸转运体蛋白家族的一个成员,在体和离体实验都表明它对维持细胞外低浓度的谷氨酸,保护细胞免受兴奋性神经毒性的损害有着重要的作用。然而到目前为止,对于GLAST在遗传性癫痫发病过程中的作用及其机制并未清楚。为此,我们采用免疫组化和RT-PCR的方法对遗传性癫痫动物模型自发性癫痫大鼠(spontaneouslyepilepsy rats)海马区的GLAST蛋白及其mRNA的表达进行了检测,以期发现GLAST与遗传性癫痫发病的关系。 方法 1.提取DNA,应用PCR方法扩增特异性基因片段筛选SER大鼠。 2.总RNA的提取:采用trizol-氯仿抽提法。 3.逆转录-聚合酶链反应扩增目的基因片段:GLAST引物(上游5‘—ATGACAAAAAGCAACGGAGAA—3′;下游5’—ATCTGCGGCAGTCACCTG-CACGAT—3′),预期片段大小为366bp;GAPDH作为内参(上游5’—AATG-CATCCTGCACCACCAA-3′;下游5’—GTAGCCATATTCATTGTCATA—3′),预期片段大小为500bp。所有引物均由上海生物工程公司合成。反应条件为:94℃预热2min,后共进行30个循环,94℃变性30s;60℃退火30s;72℃
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