论文部分内容阅读
20(S)-原人参三醇ocotillol型差向异构体(M1-1和M1-2)为20(S)-原人参三醇的代谢产物。本课题拟对20(S)-原人参三醇（PPT）进行体内外代谢以及排泄的研究，阐述其生物利用度低的原因。进一步通过研究 PPT及其代谢产物 M1-1和 M1-2对CYP3A4、P-gp的作用，为药物相互作用提供依据。 1、PPT在人和鼠肝微粒体及大鼠体内的代谢研究 本节采用LC-MS/MS法对人肝微粒体和大鼠粪便中PPT的氧化代谢产物进行鉴定。在人肝微粒体中发现12种氧化代谢产物，其中有8种是之前文献未报道的。大鼠灌胃给予PPT后，在其粪便中发现24种氧化代谢产物，其中的20种（包括在人肝微粒体中发现的6种）是首次报道。结果表明：PPT在大鼠体内比在人肝微粒体中发生了更广泛的代谢，M1-1和M1-2这对差向异构体是主要的代谢产物，其他代谢产物由它们进一步代谢产生。酶促动力学实验结果表明：RLM中，M1-1生成速率的Vmax是M1-2的2.4倍，M1-1和M1-2的消除速率相近；HLM中，M1-1生成速率的Vmax是M1-2的10.4倍，M1-2的消除速率是M1-1消除速率的11.0倍。因此，PPT代谢的种属差异主要是来源于M1-1和M1-2的立体选择性生成和它们的进一步消除。P450亚型酶对M1-1和M1-2代谢的影响研究表明：CYP3A是负责M1-1、M1-2代谢的主要亚型酶。 采用LC-MS/MS法测定大鼠血浆中PPT、M1-1和M1-2的浓度。大鼠灌胃给予PPT后的药代动力学研究表明：PPT在1h血药浓度达到最大值，2 h后基本消失；代谢产生的M1-1的Cmax明显高于M1-2，M1-1和M1-2分别在0.5 h，0.25 h血药浓度达到最大值。M1-1的T1/2为1.74 h，M1-2在3 h后在体内基本消失。PPT、M1-1、M1-2的AUC(0-t)分别为192.55 h·ng/mL、894.10h·ng/mL、15.27h·ng/mL，M1-1的AUC(0-t)约为M1-2的58倍。因此，我们推断PPT在大鼠体内迅速吸收并且消除，主要代谢为M1-1。 2、PPT及M1-1、M1-2在大鼠体内的排泄特征 PPT在体内主要代谢为20(S)-原人参三醇ocotillol型差向异构体（M1-1和M1-2），本文考察灌胃或静注给予大鼠一定量PPT或M1-1、M1-2后，其在尿液、粪便和胆汁中的排泄情况。以 LC-MS/MS法测定大鼠尿液、粪便和胆汁中的 PPT、M1-1和M1-2的浓度。结果显示，灌胃给予PPT后72 h，PPT、M1-1及M1-2的粪便累积排泄量分别为给药剂量的14.88％、1.34%、0.084%，基本不经尿排泄；灌胃给予M1-1或M1-2后72h粪便累积排泄量分别为给药剂量的4.41%、47.20%，基本不经尿排泄。灌胃给予M1-1或M1-2后36 h胆汁累积排泄量分别为给药剂量的3.01%、0.068%，静注给药M1-1或M1-2后36 h，其胆汁累积排泄量分别为给药剂量的8.80%、1.24%。实验表明，灌胃给予PPT后，PPT及其代谢物M1-1、M1-2少量经粪便排泄，基本不经尿排泄，且M1-1和M1-2在大鼠的胆汁排泄具有立体选择性差异。 3、PPT及其代谢产物M1-1、M1-2对CYP3A4和P-gp的作用 本节通过体外试验考察了PPT及其代谢产物M1-1、M1-2对CYP3A4的影响。利用咪达唑仑作为特异性探针底物，通过 LC-MS/MS法测定其主要代谢产物1-OH咪达唑仑的量研究PPT及其代谢产物M1-1、M1-2对CYP3A4酶介导的咪达唑仑代谢的影响。结果表明，PPT、M1-1和M1-2对1-OH咪达唑仑的生成均有抑制作用，且随着药物浓度的增加抑制作用增强。 本文建立了Caco-2细胞模型，观察caco-2细胞间连接紧密，TEER>600Ω·cm2，荧光黄的Papp值小于5×10-7 cm/s。结果表明，本实验室所建立的Caco-2细胞模型符合相应指标要求。 为了研究PPT、M1-1和M1-2对P-gp的影响，本节考察了PPT、M1-1和M1-2对P-gp ATPase活性的影响；对罗丹明123在Caco-2细胞中摄取的影响；对地高辛在Caco-2细胞模型中转运的影响；通过Western-boltting法研究其对P-gp在Caco-2细胞中表达的影响。结果表明：PPT、M1-1和M1-2均抑制基底P-gp ATPase活性以及维拉帕米诱导的P-gp ATPase活性；能增加罗丹明123在Caco-2细胞中的摄取；降低地高辛在Caco-2细胞中的外排；且对P-gp在Caco-2细胞中的表达无影响。因此，我们推测PPT、M1-1和M1-2不是P-gp的底物，对P-gp有抑制作用。