随着农业的发展,农药的过量和不合理使用而导致的农药残留问题,已经严重威胁着人类的健康,因此对环境及农产品进行农药残留检测具有重要意义。乙酰胆碱酯酶(AChE, EC3.1.1.7)是生物神经传导中的一种关键酶。有机磷和氨基甲酸酯类农药可以抑制昆虫AChE的活性,影响该酶的正常生理活动,从而使有机体中毒甚至死亡。基于此原理,可以利用AChE来检测农药残留的存在。目前,主要利用直接从动物的组织或血液中提取的AchE来进行农药残留检测,但是这种方法操作复杂、酶的产量低、稳定性差,使农药残留检测受到很大的影响。随着基因工程技术的发展,我们可以利用外源表达系统对AchE基因进行高效表达,进而解决酶源不足的问题。本研究利用试剂盒从家蝇头部提取总RNA,并利用RT-PCR技术克隆1737bp的乙酰胆碱酯酶基因的结构域。构建了原核表达载体pGEX-4T-1-A8,并将其转化表达宿主菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达后,成功的表达出目的蛋白,重组蛋白分子量为92kDa；通过对IPTG诱导浓度和时间的优化确定了最优表达条件为添加终浓度为2mM的IPTG诱导表达6h；经验证重组蛋白为包涵体,通过进一步的变性、复性、透析、纯化实验,得到了较纯的重组蛋白,用Brandford测得其蛋白浓度为10μg/mL;应用改良的Ellman法对其进行活性检测得出,重组蛋白具有一定的酶活性,但是活性较低。构建了真核表达载体pPIC9K-A8,重组质粒经PCR、酶切并测序验证后,采用电转化的方法转化毕赤酵母GS115菌株,以提取的酵母基因组为模板利用PCR方法筛选阳性转化子；挑取验证正确的酵母转化子在BMMY培养基中添加甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE检测到培养液上清液中含有重组表达蛋白；利用硫酸铵沉淀法对重组蛋白进行初步纯化,并对其活性进行了检测,结果显示该蛋白并没有乙酰胆碱酯酶活性。