【摘 要】
：
脂质代谢能为细胞增殖、卵母细胞成熟、受精和后续胚胎发育提供必要的能量。SIRT1有ADP-核糖转移酶和底物特异性脱乙酰酶活性,在体细胞及生殖细胞中表达广泛,在细胞增殖、分化、凋亡和糖脂代谢方面具有重要作用。目前对SIRT1是否参与调节卵母细胞脂质代谢还未见报道,为此,本试验以猪卵母细胞为原材料,通过添加SIRT1激活剂,利用免疫组化、q RT-PCR等方法了解SIRT1基因表达与卵母细胞脂质代谢的
论文部分内容阅读
脂质代谢能为细胞增殖、卵母细胞成熟、受精和后续胚胎发育提供必要的能量。SIRT1有ADP-核糖转移酶和底物特异性脱乙酰酶活性,在体细胞及生殖细胞中表达广泛,在细胞增殖、分化、凋亡和糖脂代谢方面具有重要作用。目前对SIRT1是否参与调节卵母细胞脂质代谢还未见报道,为此,本试验以猪卵母细胞为原材料,通过添加SIRT1激活剂,利用免疫组化、q RT-PCR等方法了解SIRT1基因表达与卵母细胞脂质代谢的关系,并初步研究了SIRT1/AMPK在卵母细胞脂质代谢上的作用机制。研究结果为进一步阐明SIRT1在猪卵母细胞体外成熟中的作用,并通过增强其活性促进猪卵母细胞的脂质代谢、提高卵母细胞成熟率和早期胚胎发育潜力提供理论依据。实验结果如下。1.SIRT1在体外成熟猪卵母细胞及IVF早期胚胎中的表达分析。q RT-PCR结果显示,与GV期相比,SIRT1基因在MI期、MII期卵母细胞、4-细胞期胚胎的表达显著提高（p＜0.05）,2-细胞期的表达显著降低（p＜0.05）,8-细胞期、16-细胞期、囊胚期表达均极显著降低（p＜0.01）。免疫荧光结果显示,与GV期相比,SIRT1蛋白在MI期、4-细胞期的表达极显著提高（p＜0.01）,MII期、2-细胞期、8-细胞期、囊胚期表达显著提高（p＜0.05）,16-细胞期差异不显著（p＞0.05）。2.添加SIRT1激活剂对猪卵母细胞体外成熟脂质代谢的影响。结果显示,在体外成熟培养液中加入3μM SRT 2104可显著提高猪卵母细胞第一极体排出率和囊胚率（p＜0.05）。与未处理组相比,添加SRT 2104显著提高了猪卵母细胞SIRT1蛋白表达、线粒体和脂滴数量、以及脂肪酸含量（p＜0.05）。q RT-PCR结果显示,与未处理组相比,SRT 2104处理的猪卵母细胞线粒体生成相关基因PGC-1α、TFAM、以及脂质生成相关基因ACACA、FADS1表达显著上调（p＜0.05）,FASN表达极显著上调（p＜0.01）,SREBE、PPARγ基因表达显著下调（p＜0.05）。脂质分解相关基因ATGL、CGI-58、HSL表达显著升高（p＜0.05）,MGL表达极显著升高（p＜0.01）,PLIN2表达无显著差异（p＞0.05）;脂肪酸β-氧化相关基因CPT1a、ACADS表达显著提高（p＜0.05）,CPT1b、CPT2表达无显著差异（p＞0.05）;AMPK相关基因表达显著提高（p＜0.05）。与未处理组相比,SRT 2104处理显著提高了卵母细胞ATP含量（p＜0.05）。3.SIRT1调控猪卵母细胞脂质代谢机制的研究。使用不同浓度AMPK抑制剂compound C处理猪卵母细胞,与未处理组相比,5μM compound C处理的猪卵母细胞第一极体排出率和囊胚率差异不显著（p＞0.05）,10和20μM compound C显著降低卵母细胞第一极体排出率和囊胚率（p＜0.05）,且浓度越高效果越明显。与未处理组相比,compound C处理显著降低了猪卵母细胞线粒体含量（p＜0.05）,脂滴数量增多、体积没变化,脂肪酸含量显著提高（p＜0.05）。q RT-PCR结果显示,与未处理组相比,compound C处理显著降低猪卵母细胞线粒体生成相关基因PGC-1α和TFAM的表达（p＜0.05）;脂质合成相关基因FADS1、FASN表达显著下调（p＜0.05）,ACACA表达无显著差异（p＞0.05）,SREBE、PPARγ表达极显著上调（p＜0.01）;脂质分解相关基因ATGL、CGI-58、HSL、PLIN2表达极显著下调（p＜0.01）,MGL表达无显著影响（p＞0.05）;脂肪酸β-氧化相关基因CPT1a、CPT1b、CPT2、ACADS表达显著降低（p＜0.05）;显著降低AMPKα1的表达（p＜0.05）,AMPKα2的表达无显著影响（p＞0.05）。与未处理组相比,compound C处理显著降低了卵母细胞ATP含量（p＜0.05）。以上结果表明:激活SIRT1能提高体外成熟猪卵母细胞线粒体活性、促进脂质代谢;其可能通过调控AMPK相关基因表达提高猪卵母细胞体外成熟效果和早期胚胎发育潜力。
其他文献
肝脏在畜禽机体脂质代谢中起着至关重要的作用。当肝脏脂质代谢紊乱时,常常诱发脂肪肝,严重影响畜禽的生产性能,限制畜牧产业的发展。随着养殖业的规模化和集约化发展,畜禽脂肪肝的发病率不断上升,脂肪肝的预防和治疗成为畜牧业亟待解决的难题。甘松新酮作为甘松常见的提取物之一,在镇静、促神经生长、保护心肌等方面起着至关重要的作用。然而,甘松新酮对脂质代谢和肠道微生物菌群的调控作用未见报道。本研究首先以HepG2
当前，城市建设方式逐步从“增量扩张”转向“存量优化”，存量用地更新成为热点，但各类存量用地概念和认定的规范性、分类更新策略的针对性和系统性仍不强。以四川省遂宁市中心城区为例，在落实国家政策要求、借鉴其他城市经验的基础上，对城镇存量用地的概念和认定标准进行界定，并结合新一轮国土空间总体规划编制，系统梳理遂宁市中心城区各类存量用地规模和特征，分类制定更新指引，并对更新机制提出建议。
水牛（Bubalus bubalis）是适应南方气候的重要家畜品种,具有广阔的经济开发价值。水牛奶因其营养价值丰富、产品附加值高被誉为“奶中之王”,水牛奶业已成为我国南方奶业的重要组成部分。但是,水牛养殖过程中药物滥用导致水牛奶中残留药物,对人类健康造成威胁。另一方面,水牛奶源掺假问题也被社会普遍关注。因此,检测水牛奶中药物残留和奶源成分是保障动物源食品安全的关键环节,亟待开发出灵敏有效的分析方法
＜正＞识字教学是小学语文第一学段教学的重要任务之一，也是对学生进行思维训练的重要环节。统编版小学语文教材采取集中识字与随文识字相结合的方式达成识字目标。识字的形式多种多样，如韵语识字、字理识字、事物归类识字、生活识字、查字典识字等。所谓字理识字，是从汉字构字原理上对汉字音、形、意之间的联系进行字理分析，使学生理解字的构形、读音、表意的道理的识字方法。它能激发学生识字的兴趣，提高学生识字的效率，提升
自噬是卵母细胞发育成熟过程中至关重要的生物过程。2-巯基乙醇（2-Mercaptoethanol,2-ME）常被用作一种抗氧化剂来优化家畜卵母细胞体外成熟培养体系,但目前尚缺乏其对猪卵母细胞体外成熟过程自噬影响的系统研究。基于此,本研究假设2-ME可以通过维持自噬稳态来促进卵母细胞的体外成熟。为了验证这一假设,我们以猪为研究对象,探索了 2-ME对自噬抑制或过度激活的猪卵母细胞体外成熟效果的研究。
研究进口阻垢合金微观组织及阻垢机理对于解决污垢导致的能源浪费及设备损坏等问题有重要意义。研究了一种进口阻垢合金的成分、微观组织、阻垢性能及机理。研究表明，阻垢合金的主要成分为铜、锌、镍，含有微量的锡、铅、铁、锰、铬、铌、硅；合金的阻垢率在50%到70%之间，改变铜锌合金数量、间距和改变循环水的流量都会影响铜锌合金的防垢阻垢性能。合金在水处理过程中，以锌离子为主的阳离子由铜锌合金的微小原电池反应析出
目前诱导多能干细胞（i PSCs）在疾病模型以及生物医学等研究中的应用逐渐广泛,但是对于大动物尤其水牛诱导多能干细胞的研究仍然不足,为了进一步探究水牛成纤维细胞重编程机理,理解OCT4（O）、SOX2（S）、LIN28（L）和NANOG（N）四因子对水牛胎儿皮肤成纤维细胞重编程产生的影响,本课题基于2A肽的自剪切作用,利用慢病毒过表达载体PLVX＿IRES-Zs Green构建了过表达OCT4和L
脂肪品质与肉类营养、保质期和感官特性等密切相关,是影响猪肉品质和产品质量的重要因素,但与其他肉类品质性状（如肌内脂肪、p H值、系水力和肉色）相比,脂肪品质性状（如脂肪颜色和硬度）在过去的研究中受到的关注较少。本研究从基因组水平和转录组水平探究影响北京黑猪背部脂肪品质性状（脂肪颜色和硬度）的重要候选基因,并利用直接测序法筛出重要候选基因中重要的变异位点。获得的主要研究结果如下:1.利用GEMMA软
哺乳动物卵巢上有数以千计的卵泡,但在卵泡发育过程中大部分的卵泡都会发生闭锁,影响雌性动物繁殖力,造成优良雌性资源的浪费。颗粒细胞的凋亡是引起卵泡闭锁的主要原因之一,因此探究颗粒细胞的凋亡对提高雌性动物繁殖力至关重要。内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress）可以诱导细胞凋亡,影响细胞正常功能。然而,内质网应激在水牛（Bubalus bubalis）颗粒细胞的凋亡和功能中
水牛是一种优良的种质资源,是公认的最具有开发潜力和价值的家畜之一。但雄性水牛的繁殖力低于其他牛属物种,其中一个主要的原因是精子发生异常,这在一定程度上阻碍了水牛资源的开发。支持细胞（Sertoli Cells,SCs）是维持正常精子发生必不可少的一类体细胞,通过紧密连接、间隙连接和外质特化等方式构成血-睾丸屏障,在维持雄性繁殖力方面发挥重要作用。自噬是维持细胞稳态的重要机制,可以通过维护外质特化的