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苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus, ASGV)为梨和苹果的重要病毒病之一,对果树产量和果品质量产生严重影响,进而造成经济损失。为了构建一套快速、灵敏的ASGV检测方法,本研究制备了抗ASGV的单克隆抗体,并应用于田间样品的ASGV检测,为快该病毒的速检测提供了有效制剂。取得的研究结果如下：1.本研究以仅带有ASGV的砂梨“黄花”离体植株为毒源材料,通过汁液摩擦方法接种到西方烟(Nicotiana occidentalis)和昆诺藜(Chenopodium quinoa),约7d后在昆诺藜上表现为系统的褪绿斑驳和褪绿斑点,在西方烟上表现为系统的褪绿斑和坏死。以接种发病的昆诺藜为毒源,昆诺藜为繁殖寄主,进行大量转接,繁殖病毒。2.通过差速离心和蔗糖密度梯度离心的方法从100g昆诺藜叶片中获得1mL浓度约为4.29mg/mL的病毒提纯液,并通过SDS-PAGE、Western blot和RT-PCR方法验证病毒提纯液中含有ASGV。3.用ASGV病毒提纯液通过皮下注射免疫BALB/C小鼠,取得的脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用原核表达的ASGV CP蛋白筛选阳性克隆,得到2株稳定传代且分泌抗ASGV单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过ID-ELISA检测,两株腹水抗体的效价均为1：25600；Western blot分析表明,两株单克隆抗体特异性较强,仅与ASGV的CP有特异反应；用于检测原核表达的ASGV CP时,杂交瘤细胞株2C3和1F10细胞株制备腹水抗体的检测灵敏度分别为28ng/mL和2.8ng/mL4.利用制备的单克隆抗体,采用TAS-ELISA法对49份梨和苹果样品进行ASGV检测,发现有29份样品呈阳性,阳性率达60%,与RT-PCR检测比较,其检测结果基本一致,仅有一份样品RT-PCR检测为阳性,而TAS-ELISA检测结果为阴性。