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目的非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty livet disease,NAFLD)是一种代谢相关性疾病,随着国人生活水平的提高和饮食结构的改变,我国NAFLD发病率持续明显上升,已成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病。NAFLD疾病谱包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)、肝纤维化和肝硬化,其中NASH是该病发展的的中心环节,是发展为肝纤维化和硬化的必经阶段.目前有关NAFLD的发生机制尚未阐明,学者们普遍认为胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)作为肝脏的“二次打击”是NAFLD发生的关键环节之一,迄今有关NAFLD发生和进展过程中IR的发生和维持的分子机制尚未阐明。本研究拟建立NAFLD大鼠实验模型,研究NAFLD胰岛素抵抗(IR)的主要相关靶器官或组织、血生化变化特点;探讨NAFLD发生与进展过程中IR的作用和分子机制,为NAFLD的防治提供依据。方法建立高脂饮食诱导的NAFLD大鼠模型,组织病理学结合血生化检测对所建立的模型进行评价;利用稳态HOMA_IR、HOMA_β、DI模型对NAFLD实验模型进行IR的动态观测。为研究NAFLD IR的主要靶部分及分子机制,应用免疫组织化学方法观测胰腺、肝脏及腹部组织胰岛素信号蛋白的表达情况,并观测代谢调节蛋白SREBP-1c、PPARγ、GLUT-4、SOCS-3的表达,同时检测胰腺组织的PCNA及Fas-L的表达,以观测胰岛的增生及凋亡水平,应用原位分子杂交技术检测肝脏组织ISR及GLUT4的mRNA表达水平。结果1.组织病理学评价,所建立的实验大鼠NAFLD模型6-8w呈现典型的肝脏NASH改变,至造模12w呈现典型的肝纤维化的表现,病变特点和阶段性与人体NFLD比拟性良好。2.血生化分析:与对照组相比,HOMA_IR、HOMA_β均在造模2w开始增加,且随着造模时间的延长,呈现上升趋势,分别在12w、8w达高峰,而DI水平在模型组呈下降趋势。血清TC、ALT、GGT水平分别与IRI呈相关性(P＜0.05、P＜0.05、P＜0.01)。3.IR相关靶器官和组织观测:(1)胰腺观测:1)β细胞胰岛素的表达水平呈上升的态势,在造模6w时表达显著升高;2)在NAFLD的发生和发展过程中,β细胞的增生及凋亡共存,PCNA在造模2w时表达明显增多,Fas-L在造模8w表达明显增强.3)胰腺ISR、IRS在造模早期变化不明显,6w时表达显著降低,且与血清TNFα、瘦素负相关(P＜0.05);而胰岛AKT在造模2w开始表达明显增多;4)SOCS-3在胰岛呈弥漫性表达,PPAR Y主要分布在胰岛中央部,分别在造模2w、4w时表达明显上调,二者均与ISR、IRS的表达水平负相关(P＜0.05)。(2)肝脏观测:1)肝脏ISR、IRS的阳性细胞以中央静脉周围为著,分别在造模6w、8w时表达明显减少。ISRmRNA的表达先升高,在造模6w时达高峰后降低。2)GLUT-4的蛋白表达变化与其mRNA的变化趋势相一致,分别在造模4w、6w时表达明显减少,并均与瘦素呈相关性(P＜0.05)。3)SOCS-3主要表达在中央静脉周围,造模2w表达上调,造模6w达高峰,且与IRS负相关(P＜0.05)。4)肝脏SREBP-1c及PPAR Y的表达均增多,前者以中央静脉周围为著,后者以汇管区周围为著,分别在造模2w、8w表达明显增加。(3)腹部脂肪组织观测:1)ISR、IRS、GLUT-4表达均降低,分别在造模6w、6w、8w时出现显著性变化,且与血清TNFα水平负相关(P＜0.05);2)SOCS-3、SREBP-1c、PPARγ表达均增强,分别在2w、2w、6w时出现显著性变化,其中SOCS-3与IRS负性关(P=0.05);SREBP-1c与血清脂联素、HDL、TC呈相关性(P＜0.05)。结论1.成功制备具有IR的NAFLD大鼠实验模型,主要病理学改变、血生化变化与人体NAFLD比拟性良好,为NAFLD的发病机制的探讨和药物的实验研究提供良好的实验模型;2.研究发现NAFLD大鼠在疾病过程中出现胰腺胰岛β细胞的分泌亢进、β细胞增生,是NAFLD发生与进展过程中IR的适应性改变;而胰岛β细胞的凋亡推测可能为β细胞的过分泌及增生后的衰退性表现。3.NAFLD大鼠胰腺组织存在胰岛素信号蛋白ISR、IRS表达减少,脂源性激素TNFα、瘦素和SOCS-3可能对胰岛素信号蛋白具有负性调节作用,同时诱导胰腺组织PPARγ表达上调,推测为NAFLD病理过程中机体的一种负反馈的调节机制。4.动态观测结果显示,NAFLD模型肝脏及腹部脂肪组织均发生IR,表现多种胰岛素信号蛋白表达变化,其中ISR变化最早、且显著,而PI3K的改变相对较迟,SOCS-3在肝脏、脂肪及胰腺组织中表达变化均较早,并与TNFα的表达相平行,肝脏及脂肪组织GLUT-4的表达均减少,尤以在肝脏表达改变为突出,上述多种胰岛素信号蛋白或调节分子在NAFLD模型发生和进展过程中的变化特点显示,多种胰岛素信号蛋白或调节分子参与了NAFLD IR的发生和维系,提示对其关键性环节的干预是改善NAFLD胰岛素敏感性,进行NAFLD防治的有效策略。5.相关性分析结果显示,血清GGT水平与多种NAFLD发生中的指标IRI、TNFα、瘦素、HDL等具有相关性,尤其与IRI关系密切,提示GGT有可能是反映NAFLD IR的指标之一。