论文部分内容阅读
目的探讨转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)/Smad信号通路对小鼠肝大部分切除术(partial hepatectomy,PH)后,肝星状细胞的干细胞特性的调控作用。方法第一部分:建立小鼠肝大部分切除模型,使用荧光定量PCR、Western blotting监测术前(PH0)、术后第1(PH1)、第3(PH3)、第7日(PH7)的肝组织中TGF-β通路的信号分子的表达情况。再取48只小鼠,分为抑制剂组[PH+SB-431542,5mg/(kg·d)]和对照组(PH+玉米油),并于术后第1日(PH1)、第3日(PH3)和第7日(PH7)留取肝脏标本,使用荧光定量PCR、Western blotting检测TGF-β通路的信号分子的表达情况,使用荧光定量PCR及免疫组化检测增殖和纤维化指标的表达情况。第二部分:取36只小鼠,分为抑制剂组[PH+SB-431542,5mg/(kg·d)]和对照组(PH+玉米油),并于术中(PH0)、术后第1日(PH1)、第3日(PH3)和第7日(PH7)留取肝脏标本,使用荧光定量PCR及免疫组化检测肝星状细胞标记物α-SMA、DESMIN、LGR5、SOX9、CK19、β-catenin的表达情况,使用荧光定量PCR及免疫荧光检测GFAP、AFP、β-catenin、CYP2E1的表达情况。结果第一部分:肝大部分切除术后小鼠肝脏TGF-β1的mRNA和蛋白、p-SMAD2蛋白随时间推移逐渐上调,至PH3达到高峰(均P<0.05),到PH7时则恢复至术前水平。抑制剂组小鼠与对照组相比,PH3时的肝脏TGF-β1的mRNA和蛋白水平、p-SMAD2的蛋白水平显著降低(均P<0.05);PH3和PH7的Ki67阳性细胞数量均显著升高(均P<0.05);PH1和PH3的天狼星红染色面积和Collagen1α1的mRNA水平显著降低(均P<0.05)。第二部分:肝大部分切除术后小鼠肝脏α-SMA、DESMIN、AFP、LGR5、SOX9、CK19和β-catenin的mRNA表达和免疫组化染色随时间推移逐渐升高均P<0.05),到PH7时恢复至术前水平。应用TGF-β通路抑制剂后,抑制剂组小鼠与对照组相比,术后α-SMA、DESMIN、AFP、LGR5、SOX9、CK19和β-catenin的mRNA表达和免疫组化染色均有显著降低(均P<0.05)。PH3时,对照组小鼠部分肝中央静脉区域肝细胞、肝实质血窦内星状细胞状细胞和胆管周围细胞有LGR5阳性表达;免疫组化连续切片结果显示在门脉区胆管细胞周围有α-SMA、DESMIN和SOX9、CK19的共定位表达;GFAP与AFP、CYP2E1在肝实质区域有共定位表达。结论肝再生的过程中TGF-β信号通路与Wnt/β-catenin通路之间的交互作用对肝星状细胞有重要的调控作用,使其具有干细胞特性,分化为肝细胞或胆管细胞。