【摘 要】
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本文研究了葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,对胎鼠长骨生长及Ⅰ型胶原蛋白的影响,对小鼠子宫增殖及子宫和长骨组织中两种雌激素受体亚型(ERα和ERβ)蛋白水平的影响,为评
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本文研究了葛根素对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,对胎鼠长骨生长及Ⅰ型胶原蛋白的影响,对小鼠子宫增殖及子宫和长骨组织中两种雌激素受体亚型(ERα和ERβ)蛋白水平的影响,为评价葛根素对骨及子宫的影响提供实验依据。
研究方法:①将不同浓度的葛根素加入到大鼠成骨细胞的培养基中,倒置相差显微镜下观察细胞形态和数量的改变,考察葛根素对大鼠成骨细胞生长曲线的影响;用MTT法考察葛根素对大鼠成骨细胞增殖的影响;用磷酸苯二钠(PNPP)法测定葛根素对细胞内外碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。②取16天胎龄雌性小鼠尺骨,于含有10-6mol/L雌酚酮或10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L葛根素的BGJb培养基中旋转培养48h后,解剖显微镜下测量长骨总长和骨干长,进行H.E染色,光镜下计数破骨细胞和肥大软骨细胞,进行Ⅰ型胶原免疫组织化学染色,图像分析系统下测定长骨生长板软骨细胞Ⅰ型胶原蛋白免疫反应阳性细胞面积。③健康成熟雌性小鼠,分别给予乙烯雌酚或不同浓度的葛根素,连续给药7天,并进行阴道上皮角化实验;给药结束后处死,测定子宫重量系数;取子宫及骨组织做石蜡切片,进行H.E染色,光镜下观察子宫内膜厚度变化;进行ERα、ERβ免疫组织化学染色,计数各组子宫内膜区和长骨骺板各区ERα和ERβ阳性细胞数,图像分析处理系统下测定各组ERα和ERβ阳性细胞面积。
研究结果:①大鼠成骨细胞经葛根素或雌酚酮处理3天后,各组细胞均较空白对照组增殖明显,细胞内、外ALP活性也显著增强。②经葛根素和雌酚酮处理后,胎鼠长骨骨总长和骨干长均显著性增加,骨化区破骨细胞数减少,肥大区软骨细胞数增多,与空白对照组相比,有显著性差异。在软骨骺板,葛根素能显著上调各区Ⅰ型胶原蛋白水平,并且当葛根素浓度由10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L逐渐升高时,各区Ⅰ型胶原含量也逐渐升高,表现出剂量依赖的特点。③每天给予500mg/Kg和50mg/Kg葛根素,对子宫重量、内膜厚度及子宫ERα蛋白表达无明显影响,但能显著上调子宫ERβ蛋白的水平。每天给予乙烯雌酚0.125mg/Kg则能刺激子宫内膜增殖,同时上调子宫ERα及ERβ的表达。每天给予500mg/Kg葛根素,可上调小鼠长骨生长板ERα及ERβ的表达。
研究结论:①葛根素在体外能促进成骨细胞增殖和分化,促进骨形成,抑制骨吸收,可能通过促进生长板软骨细胞合成胶原蛋白来促进软骨内成骨,从而促进骨生长。②葛根素也可能通过上调长骨ERα及ERβ表达而对骨发挥有益作用。③葛根素对小鼠子宫增殖无明显的刺激作用,这可能与其选择性上调子宫ERβ的表达有关。
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