NHX1基因转化矮牵牛及其耐盐碱性分析

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lunxyxd
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土壤盐渍化是制约农业发展、影响生态环境稳定的重要因素之一。因此,提高植物耐盐碱性是开发和利用盐渍土地最有效的一种方法。矮牵牛(Petuniahybrida)是城市绿化美化的主要植物之一,在维持和改善生态环境等方面起着重要作用。为改进矮牵牛的耐盐性,以提高其对盐渍环境的适应性,本论文开展了TvNHX1基因转化矮牵牛、转AtNHX1矮牵牛后代系相关基因表达及耐盐碱性分析的研究。主要内容与结果如下:构建碱菀液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因TvNHX1的中间载体pBI121-TvNHX1,进而构建了植物表达载体p3300-TvNHX1和pGreenⅡ-TvNHX1;并通过对p3300-TvNHX1的酶切,获得无载体骨架无选择标记的TvNHX1表达框。并利用DNA滴加柱头的方法,通过花粉管通道介导将3种载体分别转化矮牵牛;转TvNHX1矮牵牛种子直接播在150mmol/L NaCl培养基上初筛后,再对幼苗去根后在100mmol/L NaCl培养基上进行生根筛选15天,对选留的抗性植株进行目的基因的PCR鉴定,分别获得5株、11株和4株T1代阳性植株。对转AtNHX1基因矮牵牛T2代植株,利用PPT抗性筛选并通过PCR扩增目的基因AtNHX1,鉴定出49株PPT抗性植株均含有AtNHX1基因,表明AtNHX1基因在矮牵牛T2代中稳定遗传。选取7个转AtNHX1基因阳性植株,通过植物组织培养技术无性扩繁,获得了遗传背景一致的多个个体。对此进行2个时期NaCl、NaHCO3的胁迫处理,不同转基因系后代耐盐碱性表现出较大差异;盐胁迫下,不同时期的转基因植株表现出一致的耐盐性;大多数转基因植株耐盐碱性高于野生型;各转基因植株对NaCl和NaHCO3的反应一致。表明转基因矮牵牛与野生型相比具有更强的耐盐碱性。对经200mmol/LNaCl、200mmol/LNaHCO3分别胁迫48h后的不同时期转基因植株通过半定量RT-PCR分析了外源AtNHX1和内源SOD基因的表达,并检测了SOD的活性。表明,大部分转基因植株AtNHX1基因随盐诱导而上调表达,耐盐碱性与AtNHX1基因的表达趋势一致。不同时期转基因植株中AtNHX1基因的表达趋势大致相同。AtNHX1基因可能影响SOD基因的表达,从而改变植物体内SOD活性,提高植物的耐盐性。
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