LncRNA-Scrt2的鉴定及表达谱分析

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LncRNAs是近年来发现的一类在生物体中普遍存在的,对生物体生长发育有重要调控作用的RNA分子,其不具有翻译成蛋白质的功能,以RNA分子的形式参与基因表达调控。随着高通量测序技术的不断进步,越来越多的LncRNAs被发现,但其功能注释还有待进一步研究。利用已有的RNA-Seq数据,预测得到了一个位于小鼠2号染色体上,在小鼠胚胎脑中特异表达的LncRNA-Scrt2。半定量验证LncRNA-Scrt2确实在小鼠胚胎E15.5天的脑中表达。利用3’和5’RACE扩增得到了LncRNA-Scrt2长度为1582bp的转录本序列。随后利用获得的基因序列对预测的LncRNA-Scrt2进行进一步LncRNA的证明,利用ORF Finder查找转录本中ORF的长度,所有ORF都小于300bp,说明LncRNA-Scrt2不具有编码能力;利用细胞RNAFish定位LncRNA-Scrt2表达位置,其表达在F9细胞的细胞核中,从基因表达方式角度说明LncRNA-Scrt2是LncRNA。随后,对LncRNA-Scrt2在小鼠胚胎发育过程中表达谱进行了研究。定量PCR的结果显示,LncRNA-Scrt2在小鼠胚胎E12.5天到E18.5天的脑中存在表达的动态变化,并且在E15.5天表达最高。原位杂交的结果显示LncRNA-Scrt2在E10.5天、E12.5天、E15.5天的胚胎中都特异性表达在脑组织中,并且随着发育的进行,脑中的表达位置也发生变化。进一步观察E15.5天脑中表达位置,发现LncRNA-Scrt2表达主要集中在前脑的脑室区和脑室亚区,并且从内层到外层表达依次降低。综上所述,本研究发现了一个与小鼠胚胎脑发育相关的新的LncRNA-Scrt2,获得了其转录本的序列,并对转录本序列进行分析证明其确实是一个LncRNA。通过小鼠胚胎发育阶段表达谱分析证明了其特异性表达在小鼠胚胎的脑组织中,并且表达存在规律性变化。本研究加深了对脑中LncRNAs的认识,同时为LncRNA-Scrt2进一步的功能研究提供了良好的实验依据。
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