白扦花粉离体萌发过程中花粉管壁物质动态的研究

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本文采用光学显微镜,激光扫描共聚焦显微镜,免疫细胞化学及显微红外光谱分析技术,对缺硼条件下白扦(Piceameyri)花粉离体培养时,花粉管壁胼胝质和果胶质分布的动态变化进行了观察,同时,对BrefeldinA(BFA)存在的情况下,白扦花粉萌发过程中的异常变化进行了研究。 缺硼离体培养时,裸子植物白扦的花粉管壁物质分布有异常变化。与正常培养条件相比,无硼培养时花粉萌发率和花粉管生长速率明显降低,并有花粉管形态异常现象。用识别甲酯化果胶的JIM7和识别酸性果胶的JIM5对离体培养的白扦花粉管进行标记,发现在正常培养条件下酸性果胶质均匀分布于花粉管表面,而无硼培养却导致细胞壁果胶成分呈异常分布,酸性果胶在花粉管顶端大量富集;甲酯化果胶在两种条件下分布相似,但与被子植物却有很大差异;苯胺蓝诱导荧光法揭示,无硼培养引起胼胝质在顶端细胞壁积累。通过显微红外光谱(FTIR)分析,进一步验证了无硼培养导致细胞壁酸性果胶质含量的增加,并发现饱和酯含量比正常情况减少,而游离酚类化合物含量明显增加。这些结果表明,硼可能作为一种相关因子影响关键酶活性,改变细胞壁多糖网状结构以致细胞壁的延展性,从而调节花粉管生长;酚类积累对质膜完整性的影响也会对调节花粉管生长有间接作用。 白扦花粉在含有BFA的培养基中进行离体培养时,发现很低的BFA浓度(如1ug/ml)对花粉萌发和花粉管生长即产生很强的抑制作用,较高的BFA浓度(15ug/ml)会完全抑制花粉萌发和花粉管生长。并且BFA处理后的花粉管顶端区域充盈了密度很大的细胞质,但细胞器却分辨不清。鉴于BFA是一种很强的细胞生长抑制剂,因此它在花粉管顶端生长机理研究方面是一种较为理想的试剂。
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