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海参(sea cucumber)是一种传统的海洋滋补品,富含多种生理活性成分,具有较高的食用和药用价值。海参皂苷(holothurian glycosides),又称海参素(holothurin),是海参体内最重要的活性成分之一,具有抗肿瘤、抗真菌、免疫调节、细胞毒作用和溶血作用等多种生理活性。海参皂苷存在很多结构相似、差别细微的化合物,不同海参受分类和生长环境的影响,所含皂苷成分也各不相同,因此需要采用多种现代层析技术实现海参皂苷单体的分离纯化。实验室前期研究表明海参总皂苷可明显抑制脂肪积累、降低血脂、改善脂肪肝、改善胰岛素抵抗,但海参皂苷包含很多结构相似的单体化合物,构效关系并不明确,需要从海参总皂苷中分离出主要的单体化合物,并比较研究其对脂质代谢和糖代谢的影响,为海参皂苷构效关系的研究提供科学数据。本文以菲律宾刺参为原料制备纯化海参总皂苷,从中分离纯化海参皂苷单体Holothurin A (HA)和Echinoside A (EA),并进行定量分析;以肥胖动物C57BL/KsJ(db/db)小鼠为动物模型比较研究了海参皂苷单体对自发性肥胖糖尿病小鼠脂质代谢和糖代谢的影响。主要研究内容如下:(1)海参皂苷单体HA和EA的制备。以菲律宾参刺为原料,提取了海参总皂苷并分离提纯了海参皂苷单体HA和EA。利用皂苷溶于含水的丁醇或戊醇、可与水分成二相的特点,以醇粗提、大孔树脂柱层析纯化、正相硅胶柱层析纯化的方法提取了海参总皂苷,其纯度高达75%;海参总皂苷经反相硅胶柱层析法分离得到了纯度较高的海参皂苷单体HA和EA,其纯度分别为87.5%、91.0%,分离提纯效果良好。(2)海参皂苷单体HA和EA对C57BL/KsJ(db/db)肥胖小鼠脂质代谢的影响:以制得的2种海参皂苷单体HA和EA为原料,采用C57BL/KsJ(db/db)小鼠模型,比较了两种皂苷单体对小鼠脂质代谢的影响。研究发现,两种海参皂苷单体均可以均显著抑制体重增长,减少脂肪组织重量,减肥作用较为明显;两种海参皂苷单体均可以明显降低血清TC水平,但对血清TG无改善作用;两种海参皂苷均可以显著降低肝脏TG、TC含量,抑制肝脏脂质积累;海参皂苷单体HA主要通过抑制肝脏脂质的合成达到抑制肝脏脂质蓄积的作用,EA抑制脂质积累的作用机制尚不明确。在改善脂质代谢方面,海参皂苷单体HA优于EA。(3)海参皂苷单体HA和EA对C57BL/KsJ(db/db)肥胖小鼠糖代谢的影响。本文采用基因缺陷产生肥胖糖尿病的小鼠模型,研究了两种海参皂苷单体对自发性肥胖糖尿病小鼠的糖代谢紊乱的改善作用,并对其效果进行了比较。研究发现,2种海参皂苷单体均可以明显降低db/db小鼠的空腹血糖含量,有效改善糖耐受损及胰岛素抵抗;在改善糖代谢方面,海参皂苷单体EA优于HA。本研究结果表明,海参皂苷单体可有效防治代谢综合征的发生,可应用于降血脂、减肥、预防2型糖尿病类保健食品的开发。本文对海参总皂苷及海参皂苷单体HA和EA的分离提纯过程进行定量分析,为海参皂苷的规模化制备提供参考;同时,本文首次以自发性肥胖糖尿病小鼠C57BL/KsJ(db/db)为动物模型,研究了海参皂苷单体HA和EA对小鼠脂质代谢和糖代谢的影响,为海参皂苷构效关系的研究提供数据支持。