原发性支气管肺癌(primary bronchogenic carcinoma),是一种严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤,近年来发病率及死亡率与日俱增,肺癌的中医药治疗已成为肿瘤综合治疗手段中必不可少的组成部分。国医大师周仲瑛教授临床治疗肺癌经验方(周氏克金岩方),在延长肺癌患者生存期,改善生存质量,稳定瘤体,控制复发等方面临床疗效甚佳。周氏克金岩方有效成分异甘草素、木犀草素、槲皮素为黄酮类化合物,具有抗肿瘤生物活性。目的:选取周氏克金岩方有效成分异甘草素、木犀草素、槲皮素作为对象,研究其对肺癌细胞NCI-H460的体外抗肿瘤活性,探讨其作用机制。方法:选择NCI-H460肺癌细胞,分为正常组、模型组、阳性药组、异甘草素、木犀草素、槲皮素25、12.5、6.25μmol/组,采用流式细胞术检测周氏克金岩方有效成分对细胞周期的影响;Hoechst33258染色及透射电镜观察周氏克金岩方有效成分诱导细胞凋亡的形态学变化;结合Western blot法检测周氏克金岩方有效成分对EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡通路中相关蛋白表达情况。结果:异甘草素不同浓度处理细胞24h后,将细胞周期阻滞在G1期;作用24h、48h诱导H460细胞凋亡的形态学观察示细胞呈明显的核固缩、胞质浓缩等凋亡特征;25μM异甘草素处理H460细胞48小时后,电镜观察呈现细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白检测结果表明,12.5μM的异甘草素能显著抑制p-c-Raf的活化,c-caspase-7的表达以6.25μM浓度组增加最为明显;c-caspase-3的表达以25μM浓度组最为显著。木犀草素不同浓度处理细胞48h后,对细胞周期的影响是增加亚二倍体峰,阻滞在G1期,且以50μM浓度组结果最为显著;木犀草素处理H460细胞24h、48h荧光镜观察细胞凋亡程度与药物剂量及处理时间呈正依赖关系;电镜观察25μM木犀草素处理细胞48小时后,呈现细胞凋亡形态学超微结构变化;Weastern blot结果显示,12.5及6.25μM浓度组显著抑制p-EGFR及p-c-Raf的表达;c-caspase-7的表达呈剂量依赖性增加,c-caspase-3的表达以12.5μM浓度组最为显著。槲皮素处理不同浓度H460细胞24h、48h后,细胞周期停滞在S期,以12.5、25μM浓度组结果最为显著;荧光镜可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光,以25和50μM药物浓度处理组的凋亡特征更为显著;在25μM槲皮素处理细胞48小时后,电镜的观察呈现出细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μM的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μM下能促进caspase-3和7的活化。结论:周氏克金岩方有效成分能抑制H460肺癌细胞生长,其作用可能与阻滞细胞周期、抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路和诱导凋亡有关。