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目的:
(1)克隆人CD1d编码基因；
(2)制备人CD1d胞外区重组蛋白及其特异性抗体；
(3)制备人CD1d a3结构域重组蛋白及其特异性抗体；
(4)建立检测可溶性人CD1d分子的ELISA方法。
方法:
(1)通过RT-PCR克隆人CD1d编码区基因，PCR产物连接T载体，DNA测序鉴定。
(2)设计特异引物，分别扩增人CD1d胞外区和人CD1d a3结构域的编码基因，通过酶切、连接，将目的片段插入原核表达质粒pET28，分别构建pET28/CD1d及pET28/CD1d-a3表达载体。
(3)表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，以IPTG诱导重组蛋白表达，并利用Ni-NTA层析柱纯化重组蛋白。
(4)分别将纯化的人CD1d胞外区重组蛋白和人CD1d a3结构域重组蛋白免疫家兔和小鼠，分别制备兔抗人CD1d胞外区抗体和鼠抗人CD1da3结构域抗体。
(5)以间接ELISA测定抗体效价，利用免疫组化和Western blot鉴定抗体的特异性。
(6)利用SPA法纯化抗体，利用制备的上述抗体，建立双抗体夹心ELISA法检测可溶性人CD1d分子。
(7)利上述建立的ELISA方法，检测系统性红斑狼疮和类风湿关节炎等患者血清标本中的CD1d分子的表达水平，并对其临床意义进行了初步分析。
结论:
(1)成功克隆了人CDld编码区基因；(2)通过自行制备重组蛋白，成功制备了效价较高的鼠抗人CDld胞外区和兔抗人CDld α3结构域的特异性抗体；(3)利用自行制备的抗体，建立了可溶性人CDld分子ELISA检测方法。国内外尚未见可溶性人CDld分子ELISA检测方法及其应用的研究报道，本方法的建立为进一步研究CDld分子的生物学功能及其在疾病进程中的作用奠定了坚实基础。