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目的:
ELISA方法一直是临床诊断HBV感染的传统手段,通过检测病毒HBV DNA的表达物(HBsAg,HBeAg)及应答系统(HBsAb,HBeAb,HBcAb)来诊断慢性乙肝,并通过肝功的标志物(谷丙转氨酶ALT等)的水平判断疾病的进展。随着实时荧光定量PCR(RT-PCR)的应用,定量测定HBV DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。
HBV cccDNA是HBv前基因组RNA转录产物最原始的模板,也是HBV持续感染的关键因素及HBv复制最特异的指标,但由于其存在于肝细胞核内,限制了其定量检测的,有研究指出,肝内HBV cccDNA与血清HBsAg及血清HBV-DNA水平显著相关,反应了HBsAg检测的重要性。但是HBV的突变使得HBsAg阳性率降低,从而降低了HBsAg的检测的灵敏度。通常并不把HBsAg作为慢性乙肝治疗的主要检测指标,Da Silva,L.C等观察21例病人接受乙肝抗病毒治疗后的反应指出联合应用HBV DNA及HBeAg在慢性乙肝病人抗病毒治疗的监测有重要价值。
本研究通过酶联免疫分析(ELISA)法及荧光定量PCR(FQ-PCR)分别定量检测HBV血清学标志物(HBV-M)(HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb)和HBV-DNA含量,同时检测肝功能标志物ALT水平,探讨乙型肝炎病毒HBV-DNA含量与血清标记物HBeAg、谷丙转氨酶(ALT)的相关性及其对肝病患者诊断和预后预测的意义。
方法:
慢性乙肝患者523例,正常对照65例。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测乙肝患者血清学标记物(HepatitisB virus marker,HBV-M包括HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbeAb及HbcAb),其血清学模型包括以下四种组合,A组:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)(大三阳);B组:HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)(小三阳);C组:HBsAg(+)、HBcAb(+);D组:HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)。实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血清中HBV-DNA含量,酶法测定血清ALT水平。
结果:
A组HBV-DNA阳性率为92.55%,明显高于B组78.97%(x2=189.60,P<0.001)和C组50.98%(x2=234.15,P<0.001),A、B、C三组ALT水平均高于对照组(P<0.001,P<0.001,P<0.001);Log HBV-DNA与HBeAg之间存在正相关性(r=0.418,P<0.001),而ALT与Log HBV-DNA及HBeAg之间均无相关性。
结论:
HBV-DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV-M和HBV-DNA定量检测并联合ALT水平对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义。